Сравнительный анализ поведения cy5-пиримидиновых нуклеотидов в реакции амплификации по типу катящегося кольца

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Синтезированы две пары Cy5-меченных трифосфатов dU и dC с аналогичными электронейтральными структурами флуорофора, различающиеся длиной углеводородного линкера между флуорофором и азотистым основанием. Проведен сравнительный анализ их субстратного поведения в варианте изотермической амплификации ДНК по типу катящегося кольца (RCA) с использованием ДНК-полимеразы Bst 3.0. Установлено, что нуклеотиды с длинным линкером между флуорофором и пиримидиновым основанием эффективнее встраиваются в растущую цепь ДНК, в то время как нуклеотиды с коротким линкером меньше ингибируют RCA. В каждой из пар dU и dC с аналогичными флуорофорами и линкерами большую плотность встраивания демонстрировали флуоресцентно-меченные производные уридина. Установлено, что при одновременном встраивании меченых dU и dC ингибирующий эффект не суммируется. Это дает основания для более внимательного изучения различных вариантов Cy5-dC с целью повышения чувствительности анализа при одновременном введении меченых dU и dC.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

С. А. Лапа

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

П. А. Чиркова

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

С. А. Суржиков

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

В. Е. Кузнецова

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

В. Е. Шершов

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

А. В. Чудинов

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

Список литературы

  1. Ali M.M., Li F., Zhang Z., Zhang K., Kang D.K., Ankrum J.A., Le X.C., Zhao W. // Chem. Soc. Rev. 2014. V. 43. P. 3324–3341. https://doi.org/10.1039/c3cs60439j
  2. Mori Y., Notomi T. // J. Infect. Chemother. 2009. V. 15. P. 62–69. https://doi.org/10.1007/s10156-009-0669-9
  3. Piepenburg O., Williams C.H., Stemple D.L., Armes N.A. // PLoS Biol. 2006. V. 4. P. e204. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0040204
  4. Чемисова О.С., Цырулина О.А., Трухачев А.Л., Носков А.К. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2022. Т. 99. C. 126–138. https://doi.org/10.36233/0372-9311-176
  5. Lapa S.A., Volkova O.S., Spitsyn M.A., Shershov V.E., Kuznetsova V.E., Guseinov T.O., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Russ. J. Bioorg. Chem. 2019. V. 45. P. 263–272. https://doi.org/10.1134/S0132342319040043
  6. Lapa S.A., Guseinov T.O., Pavlov A.S., Shershov V.E., Kuznetsova V.E., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Russ. J. Bioorg. Chem. 2020. V. 46. P. 557–562. https://doi.org/10.31857/S0132342320040168
  7. Spitsyn M.A., Kuznetsova V.E., Shershov V.E., Emelyanova М.А., Guseinov T.O., Lapa S.A., Nasedkina T.V., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Dyes Pigments. 2017. V. 147. P. 199–210. https://doi.org/10.1016/j.dyepig.2017.07.052
  8. Shershov V.E., Lapa S.A., Levashova A.I., Shishkin I.Yu., Shtylev G.F., Shekalova E.Yu., Vasiliskov V.A., Zasedatelev A.S., Kuznetsova V.E., Chudinov A.V. // Russ. J. Bioorg. Chem. 2023. V. 49. P. 1151–1158. https://doi.org/10.1134/S1068162023050242
  9. Lapa S.A., Volkova O.S., Kuznetsova V.E., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Mol. Biol. 2022. V. 56. P. 115–123. https://doi.org/10.31857/S0026898422010050
  10. Lapa S.A., Miftakhov R.A., Klochikhina E.S., Ammur Y.I., Blagodatskikh S.A., Shershov V.E., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Mol. Biol. 2021. V. 55. P. 828–838. https://doi.org/10.1134/S0026893321040063

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Флуорофор и линкер, связывающий его с 5-положением азотистого основания. В – азотистое основание. Остальные пояснения приведены в тексте.

Скачать (97KB)
3. Рис. 2. (а) – Кинетика амплификации RCA на примере dUL и dCL как при индивидуальном, так и при совместном применении; (б) – электрофореграмма результатов RCA в двухканальном режиме возбуждения/детекции (“зеленый” канал 530/585 нм и “красный” канал 630/690 нм). L – маркер длин двухцепочечной ДНК GeneRuler 50 bp (Thermo, Латвия).

Скачать (212KB)

© Российская академия наук, 2024