MorphologyMorphologyМорфология1026-35432949-2556Eco-Vector39819910.17816/morph.398199ArticlesСтатьиResearch ArticleDEMONSTRATION OF WEIBEL-PALADE BODIES USING VON WILLEBRAND FACTOR IMMUNOCYTOCHEMISTRY AND CONFOCAL LASER MICROSCOPYВЫЯВЛЕНИЕ ТЕЛЕЦ ВЕЙБЕЛЯ-ПАЛАДЕ ПРИ ПОМОЩИ ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ НА ФАКТОР ВИЛЛЕБРАНДА И КОНФОКАЛЬНОЙ ЛАЗЕРНОЙ МИКРОСКОПИИSukhorukovaYe. G.СухоруковаЕлена Геннадьевна

Laboratory of Functional Morphology of Central and Peripheral Nervous System, Department of General and Special Morphology

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

len48@inbox.ruKirikO. V.КирикОльга Викторовна

Laboratory of Functional Morphology of Central and Peripheral Nervous System, Department of General and Special Morphology

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

iemmorphol@yandex.ruKorzhevskiyD. E.КоржевскийДмитрий Эдуардович

Laboratory of Functional Morphology of Central and Peripheral Nervous System, Department of General and Special Morphology

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

dek2@yandex.ruRAS Institute of Experimental MedicineИнститут экспериментальной медицины150120181531VOL 153, NO1 (2018)ТОМ 153, №1 (2018)717509052023Copyright ©; 2018, Eco-VectorCopyright ©; 2018, Эко-Вектор2018Eco-VectorЭко-Векторhttps://j-morphology.com/1026-3543/article/view/398199

Objective - to explore the possibility of application of immunocytochemical reaction to von Willebrand factor to analyze the localization of Weibel-Palade bodies in the venous endothelium using confocal laser microscopy. Material and methods. The study was performed on paraffin sections of human great saphenous vein (n=5). Results. A comparative study of preparations for light and confocal laser microscopy suggests that the confocal laser microscopy due to the possibility to achieve high resolution allows identification of the localization of the product in more detail, as well as to carry out a quantitative analysis. Conclusions. The presented set of reagents for immunofluorescent reaction provides high quality preparations, in which individual Weibel-Palade bodies are readily identifiable Application of the proposed set of fluorochromes for confocal laser microscopy allows easy separation of channels and the study of structures independently of each other.

Цель - исследовать возможность применения иммуноцитохимической реакции на фактор Виллебранда для анализа особенностей локализации телец Вейбеля-Паладе в эндотелии вен с использованием конфокальной лазерной микроскопии. Материал и методы. Работа выполнена на парафиновых срезах большой подкожной вены человека (n=5). Результаты. В результате сравнительного изучения препаратов, изготовленных для световой и конфокальной лазерной микроскопии, установлено, что благодаря возможности достигать высокого разрешения конфокальная лазерная микроскопия позволяет более детально выявлять локализацию продукта реакции, а также проводить количественный анализ. Выводы. Представленный набор реагентов для иммунофлюоресцентной реакции обеспечивает получение высококачественных препаратов, на которых четко идентифицируются отдельные тельца Вейбеля-Паладе. Использование предложенного набора флуорохромов при конфокальной лазерной микроскопии дает возможность легко разделять каналы и при необходимости изучать структуры независимо друг от друга.

endotheliumWeibel-Palade bodiesvon Willebrand factorimmunocytochemistryconfocal laser microscopyэндотелий, тельца ВейбеляПаладе, фактор Виллебранда, иммуноцитохимия, конфокальная лазерная микроскопияГурин Я. В. Морфологический анализ новообразованных сосудов и клеточного микроокружения // Бюл. экспер. биол. 2009. Т. 147, № 11. С. 593-596.Гурина О. Ю., Куприянов В. В., Миронов А. А., Миронов В. А. Механизмы неоваскулогенеза и его регуляции во взрослом организме // Арх. анат. 1985. Т. 88, № 1. С. 9-24.Коржевский Д. Э., Отеллин В. А., Неокесарийский А.А, Старорусская А. Н., Павлова Н. Г. Организация и цитохимические особенности барьерных структур плаценты человека // Морфология. 2006. Т. 129, вып. 3. С. 63-64.Коржевский Д. Э., Сухорукова Е. Г., Гилерович Е. Г., Петрова Е. С., Кирик О. В., Григорьев И. П. Преимущества и недостатки цинк-этанол-формальдегида как фиксатора для иммуноцитохимических исследований и конфокальной лазерной микроскопии // Морфология. 2013. Т. 143, вып. 2. С. 81-85. Переводная версия: Korzhevskii D. E., Sukhorukova E. G., Gilerovich E. G., Petrova E. S., Kirik O. V., Grigor’ev I. P. Advantages and disadvantages of zinc-ethanolformaldehyde as a fixative for immunocytochemical studies and confocal laser microscopy // Neurosci Behav Physiol 2014. Vol. 44, № 5. P. 542-545. doi: 10.1007/s11055-014-9948-8.Павлович Е. Р., Гурин Я. В., Гурина О. Ю. Ультраструктура телец Вейбеля-Палада в эндотелиоцитах сосудистого русла млекопитающих разных видов // Успехи современного естествознания. 2010. № 9. С. 123-125.Jazayeri M., Allameh A., Soleimani M. et al. Molecular and ultrastructural characterization of endothelial cells differentiated from human bone marrow mesenchymal stem cells // Cell Biol. Int. 2008. Vol. 32, № 10. P. 1183-1192. doi: 10.1016/j. cellbi.2008.07.020.Lopes da Silva M., Cutler D. F. von Willebrand factor multimerization and the polarity of secretory pathways in endothelial cells // Blood. 2016. Vol. 128, № 2. P. 277-285. doi: 10.1182/ blood-2015-10-677054.Nightingale T., Cutler D. The secretion of von Willebrand factor from endothelial cells; an increasingly complicated story // J. Thromb. Haemost. 2013. Vol. 11, Suppl. 1. P. 192-201. doi: 10.1111/jth.12225.Peyvandi F., Garagiola I., Baronciani L. Role of von Willebrand factor in the haemostasis // Blood Transfus. 2011. Vol. 9, Suppl. 2. P. 3-8. doi: 10.2450/2011.002S.Starke R. D., Ferraro F., Paschalaki K. E. et al. Endothelial von Willebrand factor regulates angiogenesis // Blood. 2011. Vol. 117, № 3. P. 1071-1080. doi: 10.1182/blood-2010-01-264507.Trotman W. E., Taatjes D. J., Bovill E. G. Multifluorescence confocal microscopy: application for a quantitative analysis of hemostatic proteins in human venous valves // Methods Mol. Biol. 2013. Vol. 931. P. 85-95. doi: 10.1007/978-1-62703-056-4_4.Wagner D. D., Bonfanti R. von Willebrand factor and the endothelium // Mayo Clin. Proc. 1991. Vol. 66, № 6. P. 621-627.Weibel E., Palade G. New cytoplasmic components in arterial endothelia // J. Cell Biol. 1964. Vol. 23. P. 101-112.Wu X. X., Gordon R. E., Glanville R. W. et al. Morphological relationships of von Willebrand factor, type VI collagen, and fibrillin in human vascular subendothelium // Am. J. Pathol. 1996. Vol. 149, № 1. P. 283-291.