MorphologyMorphologyМорфология1026-35432949-2556Eco-Vector39883610.17816/morph.398836ArticlesСтатьиResearch ArticleSIMULTANEOUS DEMONSTRATION OF GLUTAMATE DECARBOXYLASE AND SYNAPTOPHYSIN IN PARAFFIN SECTIONS OF RAT CEREBELLUMОДНОВРЕМЕННОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ ГЛУТАМАТДЕКАРБОКСИЛАЗЫ И СИНАПТОФИЗИНА В ПАРАФИНОВЫХ СРЕЗАХ МОЗЖЕЧКА КРЫСЫKorzhevskiyD. E.КоржевскийДмитрий Эдуардович

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

iemmorphol@yandex.ruGilerovichYe. G.ГилеровичЕлена Георгиевна

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

KirikO. V.КирикОльга Викторовна

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

AlekseyevaO. S.АлексееваОльга Сергеевна

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

GrigoriyevI. P.ГригорьевИгорь Павлович

лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы, отдел общей и частной морфологии

RAS North-Western Branch Institute of Experimental MedicineНаучно-исследовательский институт экспериментальной медицины СЗО РАМНSt. Petersburg State UniversityНаучно-исследовательский институт экспериментальной медицины СЗО РАМНRAS I. M. Sechenov Institute of Evolutionary Physiology and BiochemistryRAS North-Western Branch Institute of Experimental Medicine150220151471VOL 147, NO1 (2015)ТОМ 147, №1 (2015)747709052023Copyright ©; 2015, Eco-VectorCopyright ©; 2015, Эко-Вектор2015Eco-VectorЭко-Векторhttps://j-morphology.com/1026-3543/article/view/398836

The article presents highly reproducible and inexpensive protocol for simultaneous demonstration of glutamate decarboxylase (GAD67), the key enzyme of gamma-aminobutyric acid (GABA) synthesis and synaptophysin (SYP), a marker protein of synaptic vesicles using confocal laser microscopy. In the cerebellar cortex, GAD labels Purkinje cells and pinceaux in their basal parts and is unevenly distributed in the neuropil of molecular and granular layers. SYP clearly marks the contours of large dendrites of Purkinje cells in molecular layer, while in the granular layers it labels parts of cerebellar glomeruli - the terminals of the mossy fibers. GAD-immunopositive structures (GABA-ergic axons of stellate cells - Golgi cells) are often located at periphery of the glomeruli. In the peripheral zone of the glomeruli, colocalization of GAD- and SYP-immunopositive structures was observed, suggesting the presence of GABA-ergic synapses in this zone.

В работе представлен хорошо воспроизводимый и экономичный протокол одновременного выявления глутаматдекарбоксилазы (ГДК) - ключевого фермента синтеза γ-аминомасляной кислоты (ГАМК) и синаптофизина - маркерного белка синаптических пузырьков с помощью конфокальной лазерной микроскопии. ГДК в коре мозжечка крысы маркирует клетки Пуркинье и корзинки нервных волокон в их базальной части и неравномерно распределена в нейропиле молекулярного и зернистого слоёв. Синаптофизин в молекулярном слое четко контурирует крупные дендриты клеток Пуркинье, в зернистом - маркирует части клубочков мозжечка - терминали моховидных волокон. ГДК-иммунопозитивные структуры (ГАМКергические аксоны звездчатых нейронов - клеток Гольджи) часто расположены на периферии клубочков. В периферической части клубочков наблюдается солокализация ГДК-и синаптофизин-иммунопозитивных структур, что свидетельствует о присутствии в этой зоне ГАМК-ергических синапсов.

cerebellumsynapsesconfocal microscopyglutamic acid decarboxylasesynaptophysinмозжечоксинапсыконфокальная микроскопияглутаматдекарбоксилазасинаптофизинГилерович Е. Г. Иммуногистохимическое изучение структурных основ торможения в центральных ядрах мозжечка у мышей // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1998. Т. 84, № 12. С. 1325-1332.Гилерович Е. Г., Мошонкина Т. Р., Федорова Е. А. и др. Морфофункциональная характеристика поясничного утолщения спинного мозга крысы // Морфология. 2007. Т. 132, вып. 5. С. 33-37.Гиляров А. В., Кирик О. В., Коржевский Д. Э. Сравнительный анализ методических подходов, применяемых для одновременного выявления нескольких антигенов при иммуногистохимическом исследовании // Морфология. 2010. Т. 138, вып. 5. С. 59-64.Коржевский Д. Э., Кирик О. В., Карпенко М. Н. и др. Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии. СПб.: СпецЛит, 2014.Коржевский Д. Э., Сухорукова Е. Г., Гилерович Е. Г. и др. Преимущества и недостатки цинк-этанол-формальдегида как фиксатора для иммуноцитохимических исследований и конфокальной лазерной микроскопии // Морфология. 2013. Т. 143, вып. 2. С. 81-85.Сухарева Б. С., Дарий Е. Л., Христофоров Р. Р. Глутаматдекарбоксилаза: структура и каталитические свойства // Успехи биол. химии. 2001. Т. 41. С. 131-162.Evans G. J., Cousin M. A. Tyrosine phosphorylation of synaptophysin in synaptic vesicle recycling // Biochem. Soc. Trans. 2005. Vol. 33 (Pt. 6). P. 1350-1353.Garin N., Escher G. The development of inhibitory synaptic specializations in mouse deep cerebellar nuclei // Neuroscience. 2001. Vol. 105. P. 431-441.Manto M., De Zeeuw C. I. Diversity and complexity of roles of granule cells in the cerebellar cortex // Cerebellum. 2012. Vol. 11. P. 1-4.