MorphologyMorphologyМорфология1026-35432949-2556Eco-Vector39940310.17816/morph.399403ArticlesСтатьиCOMPARATIVE ANALYSIS OF METHODOLOGICAL APPROACHES APPLIED FOR THE SIMULTANEOUS DEMONSTRATION OF SEVERAL ANTIGENS IN IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDIESСРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ ДЛЯ ОДНОВРЕМЕННОГО ВЫЯВЛЕНИЯ НЕСКОЛЬКИХ АНТИГЕНОВ ПРИ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИGilyarovA VГиляровА В

Лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы (руков. - д-р мед. наук Д.Э. Коржевский), отдел общей и частной морфологии; Научно-исследовательский институтэкспериментальной медицины СЗО РАМН

KirikO VКирикО В

Лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы (руков. - д-р мед. наук Д.Э. Коржевский), отдел общей и частной морфологии; Научно-исследовательский институтэкспериментальной медицины СЗО РАМН

KorzhevskiyD EКоржевскийД Э

Лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы (руков. - д-р мед. наук Д.Э. Коржевский), отдел общей и частной морфологии; Научно-исследовательский институтэкспериментальной медицины СЗО РАМН

GiliarovA VKirikO VKorzhevskiyD EНаучно-исследовательский институтэкспериментальной медицины СЗО РАМН161120101385NO (2010)№ (2010)596409052023Copyright ©; 2010, Eco-VectorCopyright ©; 2010, Эко-Вектор2010Eco-VectorЭко-Векторhttps://j-morphology.com/1026-3543/article/view/399403

In immunomorphological studies, it is often necessary to visualize several antigens simultaneously within the same histological sections. However in practice, the application of double staining is limited due to methodological complexity. The aim of the current study was to reproduce different methods recommended for multiple immunohistochemical staining of one section and to estimate their advantages and drawbacks. Six different methodological approaches for detection of several antigens in one slide were examined. It was found that the method providing the widest resources for analysis was the fluorescent detection, the most convenient was the application of ready-to-use standardized reagents, and the cheapest method was two-color reaction with DAB-type chromogen.

В иммуноморфологических исследованиях нередко возникает необходимость одновременного выявления нескольких антигенов в пределах одного гистологического препарата. Однако применение двойного маркирования на практике зачастую ограничено методическими сложностями. Цель настоящей работы состояла в воспроизведении различных приемов, рекомендованных при проведении двойной иммуногистохимической реакции на одном срезе и в оценке их преимуществ и недостатков. Исследованы 6 методических подходов к выявлению нескольких антигенов. Показано, что наиболее широкие возможности для анализа представляют флюоресцентные методики детекции, наиболее удобным является использование готовых стандартизированных реагентов, а самой дешевой - двухцветная реакция с хромогеном на основе диаминобензидина.

immunohistochemistryantigenscolocalizationconfocal microscopyиммуногистохимияантигенысочетанная локализацияконфокальная микроскопияКоржевский Д.Э., Гилерович Е.Г., Зинькова Н.Н. и др. Иммуноцитохимическое выявление нейронов головного мозга с помощью селективного маркера NeuN. Морфология, 2005, т. 128, вып. 5, с. 76-78.Коржевский Д.Э. и Гиляров А.В. Оптимизация метода иммуноцитохимического выявления нестина на парафиновых срезах головного мозга крысы. Морфология, 2006, т. 130, вып. 6, с. 77-79.Коржевский Д.Э., Григорьев И.П. и Отеллин В.А. Применение обезвоживающих фиксаторов, содержащих соли цинка, в нейрогистологических исследованиях. Морфология, 2006, т. 129, вып. 1, с. 85-87.Коржевский Д.Э., Ленцман М.В., Кирик О.В. и Отеллин В.А. Виментин-иммунопозитивные клетки конечного мозга крысы после экспериментального ишемического инсульта. Морфология, 2007, т. 132, вып. 5, с. 23-27.Коржевский Д.Э. и Отеллин В.А. Иммуноцитохимическое выявление астроцитов в срезах головного мозга в сочетании с окраской по Нисслю. Морфология, 2004, т. 125, вып. 3, с. 100-102.Коржевский Д.Э., Петрова Е.С., Кирик О.В. и Отеллин В.А. Оценка дифференцировки нейронов в эмбриогенезе крысы с использованием иммуноцитохимического выявления даблкортина. Морфология, 2008, т. 133, вып. 4, с. 7-10.Кривова Ю.С. Барабанов В.М., Савельева Е.С. и Савельев С.В. Нейроэндокринные комплексы в поджелудочной железе нутрии (Myocastor coypus) (иммуногистохимическое исследование). Морфология, 2009, т. 135, вып. 3, с. 59-62.Саркисов Д.С. Микроскопическая техника: Руководство. М., Медицина, 1996.Abramova M., Calas A., Thibault J. and Ugrumov M. Tyrosine hydroxylase in vasopressinergic axons of the pituitary posterior lobe of rats under salt-loading as a manifestation of neurochemical plasticity. Neural. Plasticity, 2000, v. 7, № 3, p. 179-191.Fountaine T.J., Wincovitch S.M., Geho D.H. et al. Multispectral imaging of clinically relevant cellular targets in tonsil and lymphoid tissue using semiconductor quantum dots. Mod. Pathol., 2006, v. 19, p. 1181-1191.Hsu S.-M. and Soban E. Color modification of diaminobenzidine (DAB) precipitation by metallic ions and its application for double immunohistochemistry. J. Histochem. Cytochem., 1982, v. 30, № 10, p. 1079-1082.Lan H.Y., Mu W., Nikolic-Paterson D.J. and Atkins R.C. A novel, simple, reliable and sensitive method for multiple immunoenzyme staining: use of microwave oven heating to block antibody crossreactivity and retrieve antigens. J. Histochem. Cytochem., 1995, v. 43, № 1, p. 97-102.Mokry J., Ehrmann J., Karbanova J. et al. Newly formed blood vessels in neural and non-neual tissues express intermediate filament nestin. Suppl. Folia Medica Cassoviensia. 5th International Symposium on Experimental and Clinical Neurobiology. Stara Lesna, Slovak Republic, 2005, p. 75.Negoescu A., Labat-Moleur F., Lorimier P. et al. F(ab) secondary antibodies: a general method for double immunolabeling with primary antisera from the same species. Efficiency control by chemiluminescence. J. Histochem. Cytochem., 1994, v. 42, № 3, p. 433-437.Qi W., Chu J., Zhou D. and Tacha D. Characterization and appli cation of the newly developed rabbit monoclonal antibody to cytokeratin 7 (CK7) for immunohistochemistry. Appl. immonohistochem. molec. morphol., 2009, v. 17, № 3, p. 233- 238.Soriano E. and Del Rio J.A. Simultaneous immunocytochemical visualization of bromodeoxyuridine and neural tissue antigens. J. Histochem. Cytochem., 1991, v. 39, № 3, p. 255-263.Wessel G.M. and McClay D.R. Two embryonic, tissue-specific molecules identified by a double-label immunofluorescence technique for monoclonal antibodies. J. Histochem. Cytochem., 1986, v. 34, № 6, p. 703-706.