MorphologyMorphologyМорфология1026-35432949-2556Eco-Vector40252310.17816/morph.402523ArticlesСтатьиThe study of cerebral astrocyte spatial organization using confocal laser microscopyИзучение пространственной организации астроцитов головного мозга при помощи конфокальной лазерной микроскопииKORZHEVSKIYD YeКОРЖЕВСКИЙД Э

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург; RAMS Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

KIRIKO VКИРИКО В

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург; RAMS Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

SUKHORUKOVAYe GСУХОРУКОВАЕ Г

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург; RAMS Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

GILIAROVA VГИЛЯРОВА В

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург; RAMS Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg

Отдел общей и частной морфологии; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

SOLOVYOVK VСОЛОВЬЕВК В

отдел молекулярной генетики; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург; RAMS Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg

отдел молекулярной генетики; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

GRUDININAN AГРУДИНИНАН А

отдел молекулярной генетики; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург; RAMS Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg

отдел молекулярной генетики; Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

RAMS Institute of Experimental Medicine, St. PetersburgИнститут экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург150920091353NO3 (2009)№3 (2009)767910052023Copyright ©; 2009, Eco-VectorCopyright ©; 2009, Эко-Вектор2009Eco-VectorЭко-Векторhttps://j-morphology.com/1026-3543/article/view/402523

Three-dimensional reconstruction of cytoarchitectonic relations of the main components of the nervous tissue appears to be an important, yet an extremely laborious task of neuromorphology. The aims of the present study were: to develop the method permitting accurate visualization of astrocytes in rat brain slices thicker then 30 μm, to create an adequate algorithm for the study of the slides received using a confocal microscope and to perform the three-dimensional reconstructions of astrocytes from Z-series of confocal images. Different variants of slide preparation (various clearing reagents, fluorochromes, mounting media) were investigated, together with the operating modes of confocal microscope, methods of digital image processing etc. The methodical approaches are recommended that may be successfully applied for three-dimensional reconstruction and detection of spatial relations of astrocytes in mammalian brain.

Объемная реконструкция цитоархитектонических взаимоотношений основных компонентов нервной ткани представляется актуальной, но чрезвычайно сложной проблемой нейроморфологии. Цель настоящего исследования состояла в разработке метода, обеспечивающего четкую визуализацию астроцитов головного мозга крысы в срезах толщиной более 30 мкм, создании адекватного алгоритма изучения полученных препаратов при помощи конфокального микроскопа и проведении трехмерной реконструкции астроцитов по группе оптических срезов. Исследованы различные варианты приготовления препаратов (просветляющие реагенты, флюорохромы, заключающие среды), режимы работы конфокального микроскопа, методы обработки цифрового изображения и др. Рекомендованы методические подходы, которые можно успешно применять при объемной реконструкции и определении пространственных взаимоотношений астроцитов в головном мозге млекопитающих.

brainastrocytesconfocal laser microscopythree-dimensional reconstructionголовной мозгастроцитыконфокальная лазерная микроскопиятрехмерная реконструкцияКоржевский Д.Э. и Гиляров А.В. Иммуноцитохимическое выявление тканевых антигенов после длительного хранения объектов в метилсалицилате. Морфология, 2008, т. 134, вып. 6, с. 76-78.Коржевский Д.Э., Григорьев И.П. и Отеллин В.А. Применение обезвоживающих фиксаторов, содержащих соли цинка, в нейрогистологических исследованиях. Морфология, 2006, т. 129, вып. 1, с. 85-87.Коржевский Д.Э. и Отеллин В.А. Иммуноцитохимическое выявление астроцитов в срезах головного мозга в сочетании с окраской по Нисслю. Морфология, 2004, т. 125, вып. 3, с. 100-102.Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М., Мир, 1969.Ромейс Б. Микроскопическая техника. М., Изд-во иностр. лит-ры, 1954.Феофанов А.В. Спектральная лазерная сканирующая конфокальная микроскопия в биологических исследованиях. Успехи биол. химии, 2007, т. 47, с. 371-410.Lindig T.M., Kumar V., Kikinis R. et al. Spiny versus stubby: 3D reconstruction of human myenteric (type I) neurons. Histochem. Cell Biol., 2009, v. 131, № 1, p. 1-12.Periasamy A., Skoglung P., Noakes C. and Keller R. An evaluation of two-photon excitation versus confocal and digital deconvolution fluorescence microscopy imaging in Xenopus morphogenesis. Microsc. Res. Tech., 1999, v. 47, p. 172-181.Stachs O., Knappe S., Zhivov A. et al. 3D-konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie der kornealen epithelialen Nervenstruktur. Klin. Monatsbl. Augenheilkd., 2006, Bd. 223, H. 7, S. 583-588.Vuksic M., Del Turco D., Bas Orth C. et al. 3D-reconstruction and functional properties of GFP-positive and GFP-negative granule cells in the fascia dentata of the Thy1-GFP mouse. Hippocampus, 2008, v. 18, № 4, p. 364-375.