BACKGROUND: Connexin 43 (Cx43) is one of the important gap junction proteins of astrocytes and is necessary for intercellular communication. To date, data on gap junctions in the human pineal gland are limited, and Cx43 has not been examined in this organ.
AIM: This study aimed to investigate the distribution of gap junctions in the human pineal gland by simultaneous detection of Cx43 and the astrocyte marker glial fibrillary acidic protein (GFAP).
METHODS: Fixed and paraffin-embedded samples of the human pineal gland (n=4) were used. The study participants were between 19 and 34 years old. For the simultaneous detection of Cx43 and GFAP in the human pineal gland, immunohistochemistry was used, followed by analysis using an LSM 800 confocal laser scanning microscope (Carl Zeiss, Germany).
RESULTS: For the first time, our immunohistochemical study showed the presence of Cx43 in the human pineal gland. The confocal microscopy with double immunolabeling of Cx43 and GFAP visualized the individual clusters of Cx43-containing structures that were undistinguishable under transmitted light microscopy and showed the localization of the Cx43 on the membrane of astrocytes.
CONCLUSION: The proposed method makes it possible to determine Cx43-positive structures in human pineal tissue, which are localized mostly in the area of astrocyte processes.
Обоснование. Коннексин 43 (Cx43), один из важных белков щелевых контактов астроцитов, необходим для осуществления межклеточной коммуникации. На сегодня данные о щелевых контактах в клетках шишковидной железы человека единичны, а Cx43 ранее в этом органе не исследовался.
Цель исследования — изучить распределение щелевых контактов в шишковидной железе человека с применением методики одновременного выявления Cx43 и маркёра астроцитов — глиального фибриллярного кислого белка (GFAP).
Материалы и методы. Материалом для исследования служили фиксированные и залитые в парафин образцы шишковидной железы человека (n=4). Возраст обследуемых составил от 19 до 34 лет. Для одновременного выявления белков Cx43 и GFAP в эпифизе мозга человека применяли методы иммуногистохимии с последующим анализом с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа LSM 800 (Carl Zeiss, Германия).
Результаты. Проведённое нами иммуногистохимическое исследование впервые показало наличие белка щелевых контактов Cx43 в эпифизе мозга человека. С помощью двойного иммуномечения белков Cx43 и GFAP и применения конфокального микроскопа удалось визуализировать отдельные скопления структур, содержащих Cx43, которые не различались при использовании микроскопии в проходящем свете, а также показать локализацию Cx43 на мембране астроцитов.
Заключение. Разработанный метод позволяет определять Cx43-позитивные структуры в ткани эпифиза человека, которые локализованы главным образом в области отростков астроцитов.