BACKGROUND: Dysferlinopathy is heritable progressive muscular dystrophy caused by DYSF mutation. Currently, although skeletal muscle pathology has been defined, only fragmentary and limited myocardium histopathology data are available.
AIM: The study aimed to analyze the pathomorphological status of the myocardium in Bla/J mice models of dysferlinopathy at different ages.
MATERIALS AND METHODS: Data from two experimental groups were analyzed: Bla/J mice with DYSF knockout on 3, 6, and 12 months old and control wild-type Balb/C mice aged 6 months. The expressions and patterns of dyeing of protein dysferlin in the immunofluorescent search method were analyzed. These were held such parameters of the histological characteristic of the myocardium of three dyeing protocols (hematoxylin and eosin, iron hematoxylin by Rego, and hematoxylin-basic fuchsin-picric acid by Lie), and morphometry of the parameters of the cardiomyocytes (length, width of cardiomyocytes, and nuclear perimeter).
RESULTS: The immunofluorescent search method revealed high levels of dysferlin in the myocardium of the control group. Statistical analysis showed significant differences between Bla/J and Balb/C mice: the increasing length and width of cardiomyocytes in dysferlinopathy by 49.9% ((95% confidence interval, 45.9–57.4) and 35.6 (95% confidence interval, 32.9–37.9)), respectively. Nucleus perimeter was significantly reduced in the dysferlinopathy group with disease duration of 6 months (by 23.9 (95% confidence interval, 20.2–27.5) compared with the group with disease duration of 3 months and by 18.8% (95% confidence interval, 8.5–19.7)) and the control group. Consequently, progressive hypertrophy of cardiomyocytes, increasing deformation in cardiomyocytes, intercalated disk destruction, hypoxia features, and necrosis indication were observed, resulting in fibrosis. A pattern of cardiomyocyte size reduction dependent on the aging process was observed.
CONCLUSIONS: Dysferlin deficiency leads to significant damage in the myocardium of Bla/J mice.
Обоснование. Дисферлинопатия — наследственная прогрессирующая мышечная дистрофия, причиной развития которой являются мутации в гене DYSF. Патоморфологические изменения поперечнополосатой скелетной мускулатуры детально описаны при снижении экспрессии дисферлина или при его полном отсутствии, в то время как данные о гистопатологии миокарда при дисферлинопатии фрагментарны и ограничены.
Цель исследования — оценить структурные изменения миокарда в разные возрастные периоды у мышей линии Bla/J, являющейся моделью дисферлинопатии.
Материалы и методы. Исследовали нокаутную по гену DYSF линию мышей Bla/J на сроках 3, 6 и 12 мес с момента рождения. Контрольную группу составили мыши линии Balb/C в возрасте 6 мес. Проводили иммунофлуоресцентную детекцию белка дисферлина в миокарде с оценкой его наличия и распределения в кардиомиоцитах. Анализировали структуру миокарда в парафиновых срезах с применением окраски гематоксилином и эозином, железным гематоксилином по Рего и ГОФПК по Ли. Провели морфометрию длины, толщины кардиомиоцитов и измерили периметр их ядер у мышей линии Bla/J.
Результаты. Дисферлин был выявлен только в миокарде мышей контрольной группы. При 95% доверительном интервале (ДИ) длина кардиомиоцитов мышей с нокаутом гена DYSF во всех возрастах была статистически значимо больше, чем у животных контрольной группы, максимально на 49,9 (45,9–57,4)%; толщина кардиомиоцитов — на 35,6 (32,9–37,9)%; периметр ядер кардиомиоцитов мышей линии Bla/J в возрасте 6 мес был меньше на 23,9 (20,2–27,5)%, чем у мышей линии Bla/J трёхмесячного возраста, и на 18,8 (8,5–19,7)% меньше по сравнению с контролем. У мутантных мышей выявлены прогрессирующая по сравнению с нормой гипертрофия кардиомиоцитов, нарастающая деформация кардиомиоцитов, разрушение их вставочных дисков, признаки гипоксии и некроза с исходом в фиброз. С увеличением возраста животных размер клеток миокарда уменьшался.
Заключение. Дефицит белка дисферлина приводит к значимым структурным изменениям миокарда у мышей линии Bla/J.