BACKGROUND: IBA-1 (Ionized calcium binding adaptor molecule 1) is a selective marker for determining the cellular differentiation of glial macrophages. The body's macrophage system includes various organ-specific macrophages, including dermal macrophages. Currently, there are no studies that provide information on the identification of connective tissue macrophages using an immunohistochemical reaction for the detection of IBA-1 protein during skin regeneration after injury.
AIM: to identify and characterize IBA-1-immunopositive connective tissue cells in normal skin and in the perinecrotic area of a wound following mechanical injury.
METHODS: the objects of the study were skin fragments from male Wistar rats, taken from the middle third of the thigh at different stages of healing after a deep incised wound. Animals were divided into 9 groups: Group 1—intact animals (control group, n=5); the remaining groups corresponded to the time of withdrawal from the experiment (5 animals per group): 12 hours, 24 hours, 2 days, 3 days, 6 days, 10 days, 15 days, and 25 days after mechanical injury. Skin biopsies were used for immunohistochemical reactions with antibodies to the IBA-1 protein, followed by morphometric and statistical analysis of the obtained data.
RESULTS: IBA-1-immunopositive cells, identified as macrophages, were detected at the wound healing and control stages. They differed from each other in structure and morphometric characteristics. These cells were divided into 3 groups based on body size: small, medium, and large. The highest number of IBA-1-immunopositive cells, compared with the control, was detected 2, 6, and 15 days after injury. At different stages of regeneration, the population dynamics of small, medium, and large macrophages were revealed.
CONCLUSION: immunohistochemical reaction with antibodies to the IBA-1 protein is a reliable method for detecting dermal macrophages. Its use allows for the localization, heteromorphism, and heterochrony of cells in the perinecrotic wound area to be clarified, and the morphological characteristics of the macrophage differentiation to be characterized.
Обоснование. Белок IBA-1 (Ionized calcium Binding Adaptor molecule 1) является одним из селективных маркеров для определения клеточного дифферона глиальных макрофагов. В состав единой макрофагальной системы организма входят различные органоспецифичные макрофаги, включая дермальные. В настоящее время отсутствуют работы, в которых имеются сведения об идентификации макрофагов соединительных тканей с использованием иммуногистохимической реакции на выявление белка IBA-1 в процессе регенерации кожи после травмы. Цель исследования. Выявить и охарактеризовать IBA-1-иммунопозитивные клетки соединительных тканей кожи в норме и в перинекротической области раны после механической травмы. Методы. Объекты исследования – фрагменты кожи крыс-самцов линии Wistar, взятые в области средней трети бедра на разных сроках заживления после нанесения глубокой резаной раны. Животных разделили на 9 групп: 1-я – интактные особи (контрольная группа, n=5), остальные группы соответствуют срокам выведения из эксперимента (по 5 животных в группе) на 12ч, 24 ч, 2-е, 3-е, 6, 10, 15 и 25 сутки после нанесения механической травмы. Биоптаты кожи использовали для иммуногистохимических реакций с антителами к белку IBA-1 с последующей морфометрической и статистической обработкой полученных данных.
Результаты. На этапах заживления раны и в контроле были выявлены IBA-1-иммунопозитивные клетки, которые идентифицированы как макрофаги. Они отличаются друг от друга по структуре и морфометрическим характеристикам. Эти клетки по размеру тела разделены на 3 группы: малые, средние и большие. Установлено, что наибольшее количество IBA-1-иммунопозитивных клеток по сравнению с контролем определяется через 2, 6 и 15 суток после повреждения. На разных сроках регенерации выявлена динамика численности их малых, средних и больших представителей.
Заключение. Иммуногистохимическая реакция с антителами к белку IBA-1 - достоверный способ выявления макрофагов дермы. Ее применение позволяет уточнить локализацию, проявление гетероморфии и гетерохронии клеток перинекротической области раны, охарактеризовать морфологические особенности макрофагального дифферона.