Обоснование. Эндокринная офтальмопатия (ЭОП) характеризуется патологическим увеличением объёма ретробульбарной жировой ткани и фиброзом, что обусловлено нарушением дифференцировки стромальных клеток. Ключевым аспектом патогенеза ЭОП является конкуренция между адипогенной и миофибробластной дифференцировкой. Ранее было высказано предположение, что эти два пути реализуются разными субпопуляциями стромальных клеток, экспрессирующими и не экспрессирующими мембранный белок CD90 (Thy-1). Предполагалось, что секретом CD90⁺ клеток ингибирует адипогенез в CD90⁻ субпопуляции, однако механизмы этого взаимодействия, включая потенциальную роль внеклеточных везикул, остаются невыясненными.

Цель исследования — уточнить механизмы паракринного взаимодействия между субпопуляциями CD90⁺ и CD90⁻ стромальных клеток, выделенных из ретробульбарной жировой ткани пациентов с различными формами эндокринной офтальмопатии.

Методы. Из жировой ткани орбиты пациентов с ЭОП (липогенной, миогенной или смешанной формой) и контрольной группы были выделены стромальные клетки (n = 12 линий). Методом проточного сортинга клетки разделили на CD90⁺ и CD90⁻ субпопуляции. Далее провели направленную дифференцировку в миофибробласты (с использованием трансформирующего фактора роста бета) и адипоциты (с использованием коммерческого адипогенного коктейля). Оценку дифференцировки проводили с помощью: иммуноцитохимического окрашивания на α-гладкомышечный актин, виментин, коллагены; окрашивания липидов нильским красным; вестерн-блоттинга (α-гладкомышечный актин и белок активации фибробластов альфа). Для изучения паракринных эффектов использовали кондиционированную среду CD90⁺ клеток, а также её фракции, обогащённые внеклеточными везикулами и растворимыми факторам.

Результаты. При разделении стромальных клеток жировой ткани орбиты на субпопуляции CD90⁺ и CD90⁻ выявлено, что количество CD90⁻ клеток статистически значимо выше у пациентов с липогенной формой ЭОП. Обе субпопуляции обладали способностью к дифференцировке как в миофибробласты, так и в адипоциты. Однако CD90⁻ клетки продемонстрировали значительно более высокий адипогенный потенциал, в них накапливалось в 2 раза больше липидных капель, чем в CD90⁺. Вопреки первоначальной гипотезе, секретом CD90⁺ клеток (полная кондиционированная среда, внеклеточные везикулы или растворимые факторы) не ингибировал адипогенную дифференцировку CD90⁻ клеток. При этом секретом CD90⁺ клеток, включая его везикулярную и вневезикулярную фракции, значимо стимулировал адипогенную дифференцировку в самой CD90⁺ субпопуляции.

Заключение. Проведённое исследование демонстрирует, что CD90⁻ субпопуляция стромальных клеток орбиты обладает более высоким адипогенным потенциалом, что может быть связано с липогенной формой ЭОП. Установлено, что паракринное взаимодействие между субпопуляциями имеет сложный характер: секретом CD90⁺ клеток не подавляет адипогенез в CD90⁻ клетках, но стимулирует дифференцировку в адипоциты клеток собственной субпопуляции. Эти данные важны для понимания механизмов, регулирующих баланс между фиброзом и адипогенезом при ЭОП, а также указывают на необходимость дальнейшего изучения секреторной функции стромальных клеток для разработки новых терапевтических стратегий.

论证。内分泌性眼病的特征是球后脂肪组织体积病理性增生和纤维化，这是由基质细胞分化受损引起的。该病发病机制的关键在于脂肪生成分化和肌成纤维细胞分化之间的竞争。先前的研究表明，这两种分化途径是由不同的基质细胞亚群实现的，这些亚群表达或不表达膜蛋白CD90（Thy-1）。曾有假设认为，CD90⁺细胞的分泌物能够抑制CD90⁻亚群的脂肪生成，但这种相互作用的机制，包括细胞外囊泡的潜在作用，仍不清楚。

目的。本研究旨在阐明从患有不同类型内分泌性眼病患者的球后脂肪组织中分离出的CD90⁺和CD90⁻基质细胞亚群之间的旁分泌相互作用机制。

方法。从内分泌性眼病患者（脂肪生成型、肌生成型或混合型）和对照组的眼眶脂肪组织中分离出基质细胞（n = 12株）。采用流式细胞分选法将细胞分为CD90⁺和CD90⁻亚群。然后，分别使用转化生长因子β诱导其分化为肌成纤维细胞，使用商业化的脂肪生成诱导剂诱导其分化为脂肪细胞。采用以下方法评估分化情况：α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白和胶原蛋白的免疫细胞化学染色；脂质的尼罗红染色；以及蛋白质印迹法（α-平滑肌肌动蛋白和成纤维细胞激活蛋白α）。为了研究旁分泌效应，使用了CD90⁺细胞的条件培养基及其富含细胞外囊泡和可溶性因子的组分。

结果。将眼眶脂肪组织基质细胞分为CD90+和CD90⁻亚群后，我们发现，在脂肪生成型内分泌性眼病患者中，CD90⁻细胞的数量在统计学上显著高于CD90+细胞。两个亚群均具有分化为肌成纤维细胞和脂肪细胞的能力。然而，CD90⁻细胞的脂肪生成潜能显著高于CD90⁺细胞，其积累的脂滴数量是CD90⁺细胞的两倍。与最初的假设相反，CD90⁺细胞的分泌物（完全条件培养基、细胞外囊泡或可溶性因子）并未抑制CD90⁻细胞的脂肪生成分化。同时，CD90+细胞的分泌物，包括其囊泡和囊泡外组分，显著促进了CD90+亚群自身的脂肪生成分化。

结论。该研究表明，眼眶基质细胞的CD90⁻亚群具有更高的脂肪生成潜能，这可能与内分泌性眼病的脂肪生成型相关。研究发现，这些亚群间的旁分泌相互作用十分复杂：CD90⁺细胞的分泌物并不抑制CD90⁻细胞的脂肪生成，反而会刺激后者所在亚群细胞分化为脂肪细胞。这些数据对于理解内分泌性眼病中纤维化和脂肪生成平衡的调控机制至关重要，同时也提示需要进一步研究基质细胞的分泌功能，以开发新的治疗策略。