MORPHOLOGICAL CHANGES OF LYMPHOID APPARATUS OF THE LARYNX AFTER EXPERIMENTAL EXPOSURE TO VARIOUS BALNEAL FACTORS

Full Text

В настоящее время в литературе отсутствуют сведения о структурных характеристиках лимфоидной ткани глотки после воздействия разных бальнеофакторов, используемых как немедикаментозные средства профилактики и реабилитации больных, активизации резистентности организма [6]. Физиотерапевтические методы все более широко применяются в оториноларингологии, особенно при профилактике и лечении хронических и острых фарингитов. Поэтому существенное значение имеет изучение структурных характеристик лимфоидной ткани глотки, лимфоидно-железистых взаимоотношений после курсового воздействия различных бальнеопроцедур, что и явилось целью настоящего экспериментального исследования. Материал и методы. В эксперименте использовали 90 беспородных половозрелых 3-месячных крыс-самцов массой 180-200 г, которые составили три группы по 30 животных в каждой (20 в опыте, 10 - в контроле). Изучали влияние слабоминеральных органических битуминозных ванн (источник «Кала-алты»), термальных йодобромных ванн (источник «Джарли»), крепких (концентрированных) сульфидных ванн (источник «Шихова»), имеющихся на территории Азербайджана [7, 8]. Процедуры осуществляли в строгом соответствии со сроками, принятыми в бальнеологии [2]. 1-я группа крыс была подвергнута воздействию Джарлинской термальной минеральной воды, добываемой на территории Кюрдамирского района. По данным АзНИИ восстановительной медицины (2008), концентрация йода в этой воде в среднем равна 19 мг/л, брома - 80 мг/л, общая минерализация - 35 мг/л, температура воды - 36,0-37,5 ºС. Общий курс воздействий длился 28 сут, всего - 14 ванн через сутки. 1-я ванна продолжалась 8 мин, все остальные - 10 мин. На крыс 2-й группы воздействовали слабо минеральными органическими битуминозными водами (ваннами), добываемыми из источника «Кала-алты». Концентрация йода не превышает 10 мг/л, общая минерализация - 0,7-0,9 мг/л, температура воды - 36,0-37,5 ºС [1]. Крыс подвергали воздействию в течение 28 сут, по одной ванне через сутки (14 ванн); длительность 1-й ванны - 8 мин, 2-й -10 мин, последующих - 12 мин. 3-я группа крыс была подвергнута действию ванн с высококонцентрированной сероводородно-хлоридонатриевой сульфидной (крепкой сульфидной) водой из источника «Шихова». Концентрация сероводорода - 300 мг/л (АзНИИ восстановительной медицины, 2008). Температура воды - 36,0-37,5 ºС. Длительность 1-й ванны - 2 мин, 2-й - 4 мин, остальных - по 6 мин; всего - 14 ванн через сутки, продолжительность эксперимента -28 сут. После 14-й ванны крыс выводили из эксперимента путем декапитации (все манипуляции с животными проведены в соответствии с приказом № 775 от 12.08.1977 г. МЗ СССР «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных») с учетом имеющихся рекомендаций [4]. Всех крыс содержали на стандартном общевиварном рационе. Крыс контрольных групп с аналогичными общими показателями подвергали погружению в водопроводную воду в течение периодов, соответствующих длительности бальнеологических процедур. Лимфоидные узелки в стенке глотки изучали по стандартной методике. Тотальный препарат глотки помещали на 2-3 сут в 3% раствор уксусной кислоты, затем промывали в проточной воде. Окрашивание проводили гематоксилином Гарриса в течение 36-48 ч, после чего препарат помещали в 3% раствор уксусной кислоты на 6-12 ч до выявления окрашенных лимфоидных узелков на неокрашенном окружающем фоне. Микроанатомию лимфоидных структур изучали на тех же микроскопических препаратах. После отделения глотки от органов шеи материал фиксировали в 10% нейтральном формалине. Из середины верхней, средней и нижней трети глотки вырезали продольно ориентированные кусочки из задней и боковых стенок, а также по одному ориентированному поперечно кусочку размером 1,5×0,5 см. Фиксированные кусочки заливали в парафин. Поперечные гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином-эозином, азуром II-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону. На микропрепаратах глотки при помощи бинокулярного стереомикроскопа МБС-9 (Лыткаринский завод оптического стекла, Россия) и окулярной линейки измеряли длину и ширину лимфоидных узелков. Проводили по 5 измерений каждого из этих параметров в верхней, средней и нижней трети глотки. В качестве длины лимфоидного узелка определяли его размер, соответствующий длиннику глотки. Поперечное расстояние между двумя наиболее удаленными крайними зонами лимфоидного узелка считали его шириной. Плотность расположения клеток лимфоидного ряда в диффузной лимфоидной ткани и в лимфоидных узелках подсчитывали с помощью окулярной сетки с площадью ячеек 0,082 мм2. Клеточный состав лимфоидной ткани глотки исследовали при увеличении 900 по отдельности в диффузной лимфоидной ткани и лимфоидных узелках. Клетки подсчитывали в 5 полях зрения. Учитывали большие, средние и малые лимфоциты, лимфобласты, плазматические клетки, нейтрофилы, эозинофилы, макрофаги, клетки лимфоидного ряда с картинами митоза и признаками дегенерации. Их количественные соотношения подсчитывались при помощи 25-узловой сетки С. Б. Стефанова. В каждом поле зрения учитывали по 100 клеток лимфоидного ряда, принимая это количество за 100%. Значимость различий оценивали методом доверительных интервалов. Проводили сравнение между группами (Р), последовательно внутри группы (Р0), внутри группы с первым параметрам (Р1), внутри группы с максимумом (Р2). Для предварительной оценки различий между вариационными рядами использовали параметрический t-критерий Стьюдента. Для определения значимости количественных различий в группах использовали также непараметрический ранговый U-критерий Вилкоксона (Манна-Уитни). Результаты исследования. Лимфоидный аппарат глотки крыс включает диффузную лимфоидную ткань и лимфоидные узелки. Центры размножения в лимфоидных узелках отсутствуют (рис. 1). Качественный состав этой лимфоидной ткани (как диффузной формы, так и узелков) сравнительно однотипен. Он представлен малыми, средними, большими лимфоцитами, лимфобластами, клетками с картиной митоза, плазмоцитами, макрофагами, отдельными тучными клетками и эозинофилами. Эти клетки обнаружены у крыс как экспериментальных, так и контрольных групп. По нашим данным, лимфоидные образования глотки расположены преимущественно возле желез, их выводных протоков, секреторных отделов, а также в соединительной ткани. Изменения в лимфоидных образованиях глотки крыс после воздействия йодобромных и битуминозных ванн качественно однотипны и выражаются в активации лимфоцитопоэза. Об этом свидетельствует увеличение размеров лимфоидных структур и содержания клеток лимфоидного ряда (особенно лимфобластов). Так, после бальнеовоздействия наблюдается увеличение абсолютного количества клеток лимфоидного ряда в составе лимфоидных узелков (в 1,3 раза, P<0,05) и в диффузной лимфоидной ткани (в 1,3-1,4 раза, P<0,05) (рис. 2, табл. 1, 2). Содержание дегенеративноизмененных клеток снижено. В соответствии с полученными данными, после воздействия курса крепких сульфидных ванн наблюдаются частая частичная десквамация покровного эпителия, расширение венул. В строме желез и возле их секреторных отделов, а также выводных протоков клетки лимфоидного ряда почти не выявляются. Железы подвергаются кистозным изменениям. В верхнем и среднем отделах глотки после воздействия крепких сульфидных ванн лимфоидные узелки исчезают или же определяются в виде единичных структур. Уменьшается абсолютное содержание клеток лимфоидного ряда (в 1,5 раза, P<0,05), относительное содержание малых лимфоцитов (в 1,5 раза, P<0,05), клеток с картиной митотического деления (в 1,9 раза, P<0,05). Обсуждение полученных данных. Лимфоидный аппарат глотки крыс включает лимфоидные узелки и диффузную лимфоидную ткань. Отсутствие центров размножения в узелках, вероятно, объясняется высокой скоростью прохождения чужеродных антигенов (пищевых, пылевых и др.) через просвет глотки при дыхании, кормлении, кратковременностью их контакта с выстилающим эпителием. Исследования выявили существенную чувствительность структуры лимфоидных образований глотки крыс к бальнеовоздействиям. Это, очевидно, позволяет расценивать лимфоидные образования стенки глотки как биоиндикаторы, свидетельствующие о безопасности и эффективности бальнеофакторов. Полученные в настоящем исследовании данные показывают, что после йодобромных и битуминозных ванн во всех лимфоидных образованиях глотки происходит увеличение относительного содержания малых лимфоцитов (в 1,2 раза, P<0,05) - наиболее активных участников иммунных процессов. Возрастает содержание клеток с картинами митотического деления, что, наряду с увеличением количества лимфобластов, отражает активацию процессов лимфоцитопоэза, оптимизацию процессов местного иммунитета [9-11]. Вместе с тем, после курсового воздействия йодобромных и битуминозных ванн уменьшается содержание клеток лимфоидного ряда, находящихся в состоянии дегенерации. Это отражает снижение степени деструктивных процессов в составе лимфоидной ткани после действия описанных бальнеологических факторов. Результаты проведенных исследований согласуются в целом с данными авторов, изучавших морфологические изменения лимфоидной ткани трахеи, главных бронхов, мочевого пузыря и гортани крыс после аналогичных бальнеологических воздействий [3, 7, 8]. Полученные данные в целом указывают на целесообразность и эффективность использования курсовых йодобромных воздействий в санаторно-курортной практике. Эти бальнеопроцедуры оказывают, по-видимому, неспецифическое общее воздействие, активируют регенерацию и пролиферацию клеток лимфоидных образований. Иная, настораживающая картина была определена при оценке результатов воздействия крепких сульфидных ванн [5]. Полученные данные указывают на состояние морфологической регрессии лимфоидного аппарата глотки крыс. Из лимфоидной ткани почти полностью исчезают лимфобласты, что свидетельствует о подавлении процессов лимфоцитопоэза. Одновременно нарастает выраженность деструкции лимфоидной ткани - число клеток лимфоидного ряда с картиной дегенерации возрастает по сравнению с контролем в 2,8 раза. Эти результаты, наряду с имеющимися в литературе данными, вызывают озабоченность, учитывая распространенность указанных процедур в лечебной практике. Полученные данные согласуются с результатами исследования М. А. Магомедова и соавт. [5], показавших, что применение высококонцентрированных сульфидных ванн приводит у крыс к увеличению гематокрита, снижению в 1,5 раза количества эритроцитов в периферической крови, нарастанию СОЭ, развитию лейкоцитоза. Таким образом, в проведенных комплексных исследованиях лимфоидного аппарата глотки получены экспериментально-морфологические данные, свидетельствующие о стимулирующем влиянии курсовых воздействий йодобромных и битуминозных ванн на лимфоидную ткань, что указывает на их эффективность и безопасность. Между тем, полученные материалы изучения крепких сульфидных ванн свидетельствуют об иммуноингибирующем влиянии, что позволяет поставить вопрос о правомочности и целесообразности их использования в курортологии.

About the authors

V. B. Shadlinskiy

Azerbaijan Medical University

Email: Shadli-vaqif@mail.ru

T. M. Gasymova

Azerbaijan Medical University

Email: elnurgasimov@rambler.ru

D. B. Nikitiuk

I. M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: dimitrynik@mail.ru

References

Supplementary files