METHOD OF COMBINED STAINING OF RAT BRAIN SECTIONS BY SILVER SALT IMPREGNATION AND CRESYLVIOLET

Abstract

Full Text

Известно, что импрегнация препаратов нитратом серебра по Гольджи не позволяет выявить все нейроны. В связи с этим целью исследования явилась разработка метода окрашивания срезов с одновременным использованием импрегнации нитратом серебра по Гольджи и выявления нервных клеток по Нисслю. Основные этапы метода состоят в следующем: 1) умерщвление животных углекислым газом; 2) фиксация материала жидкостью Карнуа; 3) пропитка 10% раствором нитрата серебра; 4) изготовление парафиновых срезов толщиной от 5 мкм на санном микротоме; 5) окрашивание; 6) депарафинирование срезов, их регидратация в спиртах нисходящей концентрации и дистиллированной воде; 7) окрашивание срезов, наклеенных на предметные стекла, 10% осажденным раствором нитрата серебра в термостате (40 оС); 8) помещение срезов без промывки в раствор, содержащий формалин, лимонную и азотную кислоты, гидроксид аммония и дистиллированную воду; 9) проведение срезов через раствор гидроксида аммония и их промывка; 10) помещение срезов в 5% раствор тиосульфата натрия; 11) отмывание срезов и перенос в забуференный подогретый 1% раствор крезилового фиолетового; 12) помещение стекол в термостат (60 оС) на 15-20 мин, их промывка, подсушивание в 100% спирте, проводка через карбол и ксилол и заключение в канадский бальзам. Результат: выявляются нейроны, в которых контурируются ядрышко и окрашенная крезиловым фиолетовым цитоплазма, а также импрегнированные нейроны, астроциты и нейропиль. Имеются нейроны, окрашенные одновременно нитратом серебра и крезиловым фиолетовым.