Determination of the level of proliferation in the tissues of organs by immunohistochemical study of Ki-67

Abstract

Full Text

Для сравнительного тестирования отобраны следующие клоны антитела KI-67: MIB-1 (Dako), 30-9 и SP6 (Ventana). Иммуногистохимические (ИГХ) реакции проведены на одноименных автостейнерах с использованием положительного и отрицательных контролей в числе 30 для каждого клона. Протокол для окраски: RTU rmAb клон (Ventana), инкубация с антителом - 16 мин, демаскировка с CC1 - 64 мин, система детекции - UltraView. Протокол для исследования RTU IR626/IS626, mAb MIB-1 (Dako): инкубация с первичными антителами - 20 мин, демаскировка - TRS Low pH 6.1 - 20 мин, система детекции EnVision FLEX. Система визуализации, как показали результаты тестирования, не оказывает значимого влияния на окончательный результат окрашивания. В качестве положительного контроля при ИГХ исследования KI-67 наиболее адекватным является использование лимфоидной ткани интактной миндалины. При этом уровень экспрессии KI-67 лимфоидными клетками светлой зоны герминативного центра должен быть низким. Интактные ткани печени или поджелудочной железы (ПЖ) при исследовании экспрессией KI-67 можно считать хорошим отрицательным контролем. Критериями оптимального результата окраски ИГХ выявления KI-67 в контрольных органах являются яркое равномерное окрашивание 80-90% клеток герминативных В-клеточных центров как в светлой, так и в темной зонах миндалины, яркая окраска ядер единичных (не более 1%) клеток эпителия ПЖ или ядерная окраска в единичных (не более 1%) гепатоцитах. При правильном проведении ИГХ реакции в исследуемой ткани органа не должно выявляться окрашенного фона и цитоплазматического окрашивания в анализируемых клетках.