High resolution electron microscopic visualization of preselected noradrenergic axons or axon terminals in immunostained cryostat sections after flat-embedding in epoxy resin

Abstract

Full Text

При идентификации в световом микроскопе небольших структур, таких как предполагаемые аксональные терминали и перемещения их на ультратонкие срезы для электронно-микроскопического подтверждения их синаптической природы, в нейробиологии используются два подхода. При наиболее простом подходе выбирается область, где плотность таких терминалей наиболее высока. В этом случае нет необходимости предварительно выбирать отдельную терминаль для анализа, и из-за их высокой локальной плотности, по меньшей мере, некоторые из них будут обнаружены на соответствующих ультратонких срезах. Однако, когда исследование сосредоточено на областях с низкой плотностью иннервации, отдельные участки должны быть идентифицированы на криостатных срезах, а для электронно-микроскопического анализа их важно идентифицировать на полу- и ультратонких срезах. В настоящем исследовании представлены новые морфологические данные по вопросу о том, действует ли норадреналин (НА) через синаптическую или через диффузную (объемную) передачу в корковых и подкорковых областях. Решение этой проблемы действительно требует выявления пресинаптических норадренергических структур, которые иммунопозитивны для дофамин-бета-гидроксилазы, маркера НА, в областях с низкой плотностью терминалей, высвобождающих НА, таких как кора головного мозга. Для достижения этой цели мы разработали ряд отдельных технических улучшений, которые после первичного обнаружения на криостатных срезах в целом гарантируют повторную идентификацию небольших структур, таких как предполагаемые синапсы, на электронограммах.