АДРЕНЕРГИЧЕСКАЯ И ХОЛИНЕРГИЧЕСКАЯ ИННЕРВАЦИЯ ГЛОТОЧНОЙ МИНДАЛИНЫ У ДЕТЕЙ С ХРОНИЧЕСКИМ АДЕНОИДИТОМ

Полный текст

Глоточная миндалина является одним из структурно оформленных скоплений так называемой «лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистыми оболочками» (mucosa associated lymphoid tissue - MALT), принимающих участие в механизмах иммунной защиты [7, 17, 18]. Так же, как и другие образования лимфоэпителиального глоточного кольца, глоточная миндалина вместе с неспецифическими защитными факторами (мукоцилиарный транспорт, продукция лизоцима, интерферона и т. д.) осуществляет барьерную функцию слизистых оболочек полости рта, глотки и верхних дыхательных путей [5-7]. Гипертрофированную глоточную миндалину называют аденоидными разрастаниями, или аденоидами [4]. Лимфоидная ткань, ассоциированная со слизистыми оболочками, обильно иннервирована [10]. Постганглионарный симпатический нейромедиатор - норадреналин, выделяющийся из варикозностей адренергических нервных волокон, оказывает влияние на структурные элементы лимфоидной ткани через периартериолярно-лимфатическое пространство [18]. Наличие адренорецепторов на мембранах лимфоцитов и других лимфоидных клеток указывает на существенное значение адренергических нейромедиаторов в регуляции местного и системного иммунитета. Медиаторы в нервных волокнах и иммунокомпетентные клетки представляют собой единую систему, посредством которой иммунные ответы могут быть стимулированы или подавлены [16]. Считается, что нервные волокна проникают в лимфоидную ткань вместе с кровеносными сосудами, разветвляются в ней и, выделяя нейромедиаторы, воздействуют на лимфоциты и макрофаги [15]. Данные об адрен- и холинергической иннервации аденоидов представлены в литературе недостаточно [14], несмотря на то, что число детей с гипертрофией глоточной миндалины неуклонно возрастает. При этом хронический аденоидит составляет 45,2% в структуре ЛОР-патологии, и у многих больных отмечаются вегетативные расстройства и иммунодефицитные состояния [12]. В связи со сказанным, цель настоящей работы - исследовать адренергическую и холинергическую иннервацию глоточной миндалины у детей с хроническим аденоидитом. Материал и методы. Материал для морфологического исследования был получен во время операций при хирургическом лечении 50 детей в возрасте от 5 до 14 лет с диагнозом: хронический аденоидит. Гипертрофия глоточной миндалины была определена как аденоидные разрастания II-III степени. Все дети поступали на лечение в Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт уха, горла, носа и речи. В предоперационное обследование, помимо стандартных методов, входила функциональная диагностика состояния автономной нервной системы (АНС) с оценкой вегетативного тонуса, вегетативной реактивности и вегетативного обеспечения деятельности [2, 8, 9], что позволило разделить всех пациентов на 3 группы. 1-ю группу составили 25 детей со сниженным тонусом АНС и вегетативной гиперреактивностью, 2-ю - 16 детей с повышенным тонусом АНС и низкой вегетативной реактивностью, 3-ю - 9 детей с оптимальным вегетативным тонусом (эйтония) и нормальной реактивностью. Вегетативное обеспечение деятельности во всех случаях было адекватным. Аденоидные разрастания, удаленные во время операции, помещали в криостат-микротом, изготавливали серийные срезы толщиной 20-25 мкм и монтировали на предметные стекла. Одну часть срезов обрабатывали по традиционной методике и окрашивали гематоксилином - эозином, другую - для постановки гистохимических реакций, используя способ, позволяющий выявлять адренергические и холинергические нервные волокна на одном и том же срезе [11]. Для выявления адренергических нервных структур препараты инкубировали в 2% глиоксиловой кислоте (Fluca A. G., Швейцария) на 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,0), которая образует интенсивно люминесцирующие соединения с биогенными аминами в тканях [14]. Инкубацию срезов проводили в течение 15 мин, промокали фильтровальной бумагой и высушивали под феном в струе теплого воздуха, после чего помещали в сушильный шкаф и 5 мин досушивали при температуре 80 ºС. Заключения в бальзам или полистерол не проводили, покровных стекол не использовали. Полученные препараты изучали в люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ-Р8 (ЛОМО, Россия), используя светофильтр СЗС с длиной волны 480 нм. Интенсивность специфической люминесценции адренергических нервных волокон, которая отражает их функциональную активность, определяли с помощью фотометрической насадки ФМЭЛ-1А (ЛОМО, Россия) при использовании зонда диаметром 0,1 мм и объектива 40. Измерения проводили в области варикозностей и между ними на 2-3 волокнах, наиболее соответствующих диаметру зонда. Диаметр фотометрируемого участка (Df) составлял 2,5 мкм. Расчет проводили по формуле: где Di - диаметр кружка без отражающего слоя на вогнутом зеркале ФМЭЛ (D=0,1 мкм), К - коэффициент, зависящий от увеличения насадки (в данном случае К=1), Fоб - увеличение объектива. В каждом отдельном случае проводили по 50 измерений. В качестве источника света использовали лампу ДРШ-250, соблюдали одинаковый режим питания источника постоянного тока и одинаковую нагрузку фотоусилителя ФЭУ-39А. Показатели фотоусилителя ФЭУ- 39А, свидетельствующие об интенсивности люминесценции измеренных объектов, выражали в условных единицах (усл. ед.). Интенсивность люминесценции (ИЛ) объекта (Ио) и фоновую аутолюминесценцию (Иф) измеряли отдельно. Разница двух показателей соответствовала интенсивности люминесценции катехоламинов в адренергических нервных структурах: ИЛ=Ио-Иф, где Ио - показания усилителя при фотометрировании нервных волокон, Иф - показания усилителя при фотометрировании участка, свободного от волокон и клеток. Полученные данные обрабатывали с использованием статистического программного пакета «Statistica 6.0». При статистической обработке данных вычисляли средние значения, ошибки средних и дисперсии. Значимость различий средних оценивали по критерию Стьюдента. После измерения ИЛ адренергических нервных волокон на тех же срезах проводили гистохимическую реакцию для выявления холинергических нервных структур по методу Карновского-Рутс [19]. Препараты инкубировали в течение 60-90 мин в термостате при 37 ºС в смеси, содержащей в качестве субстрата ацетилтиохолинйодид, споласкивали, обезвоживали в этаноле возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в бальзам. Обработка срезов инкубационной смесью, содержащей в качестве субстрата гистохимической реакции ацетилтиохолинйодид, позволяла оценить активность ацетилхолинэстеразы - фермента, играющего важную роль в обмене медиатора ацетилхолина, и косвенно судить о холинергической активности нервных волокон, локализованных в исследуемой ткани. Результаты исследования. При морфологическом исследовании операционного материала было обнаружено, что гистологические изменения в глоточной миндалине у детей с хроническим аденоидитом касались как поверхностного эпителия, так и лимфоидной ткани, и постоянным характерным признаком было наличие очаговых или диффузных разрастаний соединительной ткани миндалины. Гипертрофированная миндалина была представлена отчетливым выпячиванием слизистой оболочки носоглотки. В собственной пластинке слизистой оболочки, выстилающей заднюю стенку носоглотки, располагалась лимфоидная ткань. В поверхностном эпителии наблюдались признаки перехода многорядного столбчатого эпителия в многослойный плоский, увеличение числа секреторных элементов, инфильтрация лимфоцитами, иногда - нейтрофильными гранулоцитами. Складки эпителия проникали вглубь миндалины, но типичных крипт с полостями не образовывали. Лимфоидная ткань включала мелкие с нечеткими границами и крупные или гигантские узелки с большим количеством макрофагов, а также межузелковую лимфоидную ткань. Гиперплазия последней часто сочеталась с увеличением количества тонких венозных сосудов. Гистохимическое исследование показало, что у детей 2-й и 3-й группы адренергические нервные волокна глоточной миндалины были в основном представлены перивазальными сплетениями (рисунок, а). От перивазальных нервных сплетений, состоящих из волокон с большим количеством варикозностей, к лимфоидной ткани глоточной миндалины отходили ветви, которые формировали межузелковые сплетения. Волокна анастомозировали между собой и располагались субэпителиально. Отдельные волоконца локализовались в непосредственной близости от эпителия и, по-видимому, принимали участие в иннервации эпителиальных клеток дистантным способом. От перивазальных и межузелковых адренергических нервных сплетений ответвлялись тонкие волокна, терминали которых проникали внутрь лимфоидных узелков (см. рисунок, б). У детей 1-й группы локализация адренергических нервных структур в области аденоидных разрастаний была такой же, однако нервные сплетения выглядели менее густыми, а интенсивность люминесценции - сниженной. При оценке функциональной активности адренергических нервных волокон оказалось, что в 1-й группе ИЛ варикозностей и межварикозных частей составляла 22,7±2,5 и 37±4 усл. ед., во 2-й группе - 57,3±1,4 и 16±4 усл. ед., в 3-й группе - 34,3±2,2 и 30±4 усл. ед. Холинергические нервные волокна располагались аналогично адренергическим, но выглядели более толстыми, а их варикозности - более крупными. Об активности холинергических нервных структур можно было судить по интенсивности окрашивания (от светло-желтого до темно-коричневого) и количеству варикозностей, принадлежащих тому или иному волокну. Как и адренергические волокна, холинергические нервные проводники часто отходили от периваскулярных сплетений и иннервировали межузелковую лимфоидную ткань (см. рисунок, в). Проникновения отдельных холинергических терминалей внутрь лимфоидных узелков замечено не было. Обсуждение полученных данных. Микроскопически в глоточной миндалине различают покровный эпителий (многорядный реснитчатый на поверхности и небольшие участки многослойного плоского эпителия в криптах), лимфоидные узелки и узелковую лимфоидную ткань [3, 5]. Аденоидные разрастания считаются следствием гиперпластических процессов, развивающихся в миндалине при воспалении [5, 7]. Сведения об адренергических и холинергических нервных структурах, выявленных нами на одном и том же срезе, а также об их функциональной активности, определяемой по интенсивности люминесценции, в литературе практически отсутствуют. Между тем, кроме участия в иммуногенезе, нейромедиаторы, выделяющиеся из терминалей нервных волокон и контактирующие с мембранными рецепторами иммуноцитов, регулируют их трофическое состояние. При этом неадекватная активность иннервирующих структур может приводить к нейродистрофиям в виде дегенеративно-гиперпластических процессов [1]. Результаты проведенного нами гистологического исследования в основном совпадают с данными литературы [3, 6, 7], а гистохимического - свидетельствуют о богатой адрен-и холинергической иннервации глоточной миндалины так же, как любого другого структурного образования лимфоэпителиального глоточного кольца [5]. Они коррелируют с физиологическими исследованиями активности АНС: самые малые значения интенсивности люминесценции в варикозностях обнаружены при низком вегетативном тонусе и гиперреактивности, а самые большие - при высоком вегетативном тонусе и слабой вегетативной реактивности. Таким образом, можно полагать, что оперативный запас нейромедиатора в нервных волокнах соответствует таким показателям функциональной деятельности АНС, как вегетативный тонус и вегетативная реактивность. В целом, полученные результаты можно использовать при обсуждении патогенетических механизмов хронического аденоидита с позиций вовлеченности адрен-и холинергических нервных структур в гиперпластический процесс, развивающийся в глоточной миндалине у детей при определенных, часто неблагоприятных условиях.

Об авторах

Татьяна Ивановна Шустова

Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт уха, горла, носа и речи

лабораторно-диагностический отдел 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, 9

Александр Юрьевич Юрков

Клиническая больница № 122 им. Л. Г. Соколова

Email: infomed@med122.com
194291, Санкт-Петербург, пр. Культуры, 4

Максим Борисович Самотокин

Клиника «АБИА»

Email: msamotokin@yandex.ru
197371, Санкт-Петербург, пр. Королёва, 48, корп. 7

Список литературы

Дополнительные файлы