НЕЙРОЭПИТЕЛИАЛЬНЫЕ ТЕЛЬЦА ЛЕГКОГО У КРЫСЫ

Аннотация

Статья посвящена исследованию нейроэпителиальных телец (НЭТ) в легких у здоровых половозрелых крыс линии Вистар (n=12). С помощью иммуноцитохимической реакции на синаптофизин были выявлены НЭТ и подходящие к ним иммунопозитивные нервные терминали. Установлено, что НЭТ в легком у крысы являются постоянно присутствующими элементами. В отличие от диффузных нейроэндокринных элементов, для них характерно групповое расположение клеток. Обнаружено, что у части НЭТ эфферентная иннервация отсутствует.

Полный текст

Нейроэпителиальные тельца (НЭТ) — особые рецепторные структуры в эпителии бронхов, которые были открыты в конце 30-х годов ХХ в. [11]. Несмотря на длительную историю исследования, функции НЭТ остаются не вполне понятными. Предполагают, что главная из них — анализ газового состава воздуха и участие в физиологическом изменении функции легких в ответ на изменение качественного состава вдыхаемого воздуха [1, 9]. До настоящего времени сохраняется неопределенность и в вопросах структурной организации НЭТ, а также в классификации нейроэндокринных элементов легкого. Несмотря на предполагаемую существенную роль НЭТ в системе нормальной регуляции функции легких, их изучению посвящено крайне мало исследований, что, по-видимому, объясняется невозможностью их идентификации при использовании обзорных и специальных методов окраски препаратов, применяемых для изучения строения легких в норме и патологии. Цель данной работы — выявление НЭТ в легком у крысы и определение их клеточной организации. Материал и методы. Исследование проведено на 12 половозрелых крысах-самцах линии Вистар. Содержание животных и все экспериментальные манипуляции осуществляли с учетом «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ № 755 от 12.08.1977 г. МЗ СССР). Морфологическому исследованию подвергали легкие интактных крыс. Материал фиксировали в цинк-этанол-формальдегиде [4], обезвоживали и заливали в парафин обычным способом. НЭТ выявляли при помощи реакции на синаптофизин [2]. Срезы депарафинировали, перед постановкой иммуноцитохимической реакции проводили тепловое демаскирование антигена. Для блокирования эндогенной пероксидазы использовали 3% водный раствор перекиси водорода (10 мин). Блокирование неспецифически связанных антител проводили в блокирующем растворе Protein Block (Springbio, США) в течение 10 мин. Для выявления НЭТ использовали мышиные моноклональные антитела (SY38) к синаптофизину (разведение 1:30, Dako, Дания) и вторичные антитела, конъюгированные с полимером и пероксидазой (EnVision + System Labelled Polymer-HRP Anti-Mouse, Dako, Дания). Визуализацию продукта иммуноцитохимической реакции проводили с использованием 3,3-диаминобензидин-тетрагидрохлорида (DAB+, Dako, Дания). Часть срезов после постановки реакции докрашивали либо альциановым синим, либо гематоксилином. Препараты обезвоживали в этаноле и изопропаноле, просветляли в ксилоле и заключали в Cytоseal 60 (Thermo scientific, США) [3]. Определяли долю НЭТ, содержащих различное количество клеток. Результаты исследования. При проведении реакции на синаптофизин НЭТ были обнаружены у всех исследуемых животных. На полученных препаратах НЭТ выглядели как группы клеток, интенсивно окрашенные хромогеном в коричневый цвет (рисунок), реже они были представлены единичными клетками, расположенными в составе однослойного кубического эпителия мелких бронхов и респираторных бронхиол. Клетки в составе НЭТ имели овальную форму с отчетливо различимым ядром, в области которого продукт иммуноцитохимической реакции отсутствовал. НЭТ встречались от 2 до 6 на срезе легкого, захватывающего все его доли. Рядом с большинством НЭТ располагались синаптофизин-иммунопозитивные терминали (СФИТ). Встречались также НЭТ, не имеющие подходящих к ним СФИТ. Были обнаружены и единичные синаптофизин-иммунопозитивные клетки, находившиеся в составе однослойного эпителия малых бронхов. В ряде случаев встречались единичные клетки в составе эпителиального пласта, которые в отличие от клеток НЭТ были смещены к его базальной части. Количество клеток в обнаруженных НЭТ варьировало. Большее число НЭТ (45%) состояло из 5–10 клеток; 40% содержали 10–20 клеток; 8% — 2–5 и 7% — имели единичные синаптофизин-иммунопозитивные клетки. Помимо НЭТ, были обнаружены СФИТ, которые преимущественно локализовались в мышечной оболочке бронхов и по ходу кровеносных сосудов. Обсуждение полученных данных. В результате проведенного исследования установлено, что НЭТ содержатся в однослойном кубическом реснитчатом эпителии бронхиол. В отличие от других клеток, их клетки немного выступают над поверхностью эпителия, и обычно их ядра не смещены к базальной части эпителиального пласта. Единичные синаптофизин-иммунопозитивные клетки были смещены к базальной части эпителиального пласта и, по-видимому, являются не рецепторными структурами, а элементами диффузной нейроэндокринной системы легких, которые регистрируются и другими методами [8]. В нашем исследовании использовалось иммуногистохимическое выявление синаптофизина с помощью специфических моноклональных антител [2]. Синаптофизин является главным интегральным белком мембран синаптических пузырьков нейронов нервной системы [12], таким образом, он участвует в регуляции и осуществлении синаптической передачи. Поэтому его присутствие в клетках свидетельствует о их принадлежности к нервным или нейроэндокринным элементам. Это объясняет причину того, почему в полученных препаратах одновременно окрашивались НЭТ, отдельные нейроэндокринные клетки и СФИТ. По данным литературы, афферентную иннервацию НЭТ осуществляют 3 типа терминалей. Первый тип — это нервные волокна блуждающего нерва, берущие начало в узловатом ганглии; второй — афферентные волокна спинального происхождения которых формируют сплетение под НЭТ, не проникая между эпителиальными клетками; третий — нитроергические волокна [5, 9]. Реакция на синаптофизин не является селективной по отношению к отдельным медиаторам и выявляет все терминали, что способствует ее широкому использованию при исследовании эфферентной иннервации различных органов [6, 7]. Таким образом, НЭТ в легком у крысы являются постоянно присутствующими элементами. В отличие от диффузных нейроэндокринных элементов, для них характерно групповое расположение клеток. Взаимодействие НЭТ и СФИТ не является постоянной комбинацией, что свидетельствует об отсутствии эфферентной иннервации у части телец.