METHOD OF TWO-STEP ELECTRON TOMOGRAPHY OF THE SERIAL SECTIONS FOR 3D-RECONSTRUCTION OF THE TISSUE AND CELLULAR STRUCTURES

Abstract

Full Text

Для детальной визуализации трехмерной ультраструктуры и ее комплексного описания в тканях, клетках и органеллах нами был разработан метод двухступенчатой электронной томографии, позволяющий сочетать анализ большого объёма материала с высоким разрешением мембранных структур не только по осям Х и Y, но и по оси Z. Метод состоит из двух последовательных этапов электронной томографии с меньшим (1-й этап) и бóльшим (2-й этап) увеличением. На 1-м этапе данный метод предполагает получение серий изображений с полутонких серийных срезов толщиной 200-250 нм (ув. 7800-9600) с помощью классической электронной томографии с целью построения трехмерных реконструкций и последующим анализом данных. Задачей 1-го этапа является выявление ультраструктур, визуализация которых обычно затруднена в силу проекций других структур, присутствующих на срезе, и малого разрешения. Современное программное обеспечение позволяет на 2-м этапе легко найти и осуществить повторный забор изображений на большом увеличении (от 25 000 до 62 000) на серийных срезах в зависимости от типа исследуемой ультраструктуры. В конечном итоге, путем сопоставления полученных реконструкций по вертикальной оси удается добиться создания трехмерной модели органелл с разрешением 3-4 нм в большом объеме. Данный метод активно используется для изучения межклеточных соединений, органелл в трехмерном матриксе и других модельных системах.