DEPENDENCE OF GRANULAR CEREBELLAR NEURONS VIABILITY ON PROPERTIES OF CELL-FREE DNA UNDER THE CONDITIONS OF GLUTAMATE EXCITOTOXICITY IN VITRO

详细

全文:

Показано, что внеклеточная ДНК (вкДНК) инициирует в клетках-зернах мозжечка секрецию ДНК. Цель работы - исследовать жизнеспособность зернистых нейронов в первичной органотипической культуре коры мозжечка у крыс в зависимости от молекулярных свойств вкДНК в норме и при глутаматной эксайтотоксичности (ГЭТ). Использовали модельные образцы гомологичной ДНК: геномной немодифицированной (gДНК) и окисленной (oxДНК) с разной степенью окисления и фрагментации: высокомолекулярной с окислительными модификациями 8-дезоксигуанозина и низкомолекулярной с одно-и двунитевыми разрывами, содержащей тимидингликоль. Контролем в каждом случае (n=6) служила культура без ГЭТ. Пробы вкДНК в концентрациях 1, 5, 15 и 50 нг/мл вводили в среду культивирования (26-луночные планшеты) на 6-е сутки после посадки культуры за 2,5 ч или через 30 мин после индукции ГЭТ (инкубация 10 мин с глутаматом натрия, 100 мкМ при 37 ºС и атмосфере 5 % CO2). Выживаемость клеток определяли через 24 ч экспозиции МТТ-тестом на спектрофотометре SHIMADZU UV-160A (Япония) при длине волны 540 нм. Результаты показали, что в контроле жизнеспособность нейронов не зависит от свойств вкДНК. В условиях ГЭТ gДНК в концентрациях 15 и 50 нг/мл дает дозозависимый нейропротекторный эффект. При этом охДНК, напротив, снижает выживаемость нейронов даже в концентрациях ниже 5 нг/мл, особенно при введении их после индукции ГЭТ (p<0,05). Наибольший эффект (p<0,001) наблюдается у слабоокисленной высокомолекулярной ДНК в высоких концентрациях. Таким образом, молекулярные свойства вкДНК не влияют на жизнеспособность зернистых нейронов в норме, но имеют решающее значение для их выживания в условиях ГЭТ.