Мембранные методы получения конъюгатов на основе пероксидазы хрена для определения вирусных инфекций

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Предложен подход к использованию мембранной фильтрации в разработке методик получения конъюгатов на основе пероксидазы хрена для определения вирусных инфекций. Показано, что данный подход значительно проще, быстрее и дешевле, чем хроматографический. Практически отсутствуют потери конюгатов при очистке компонентов. Предложена методика мембранной очистки пероксидазы хрена и ее анализа методом капиллярного электрофореза. Методика также позволяет приготовить конъюгат пироксидазы хрена и антигена вируса для использования в иммуноферментном анализе (ИФА) для выявления антител класса М к вирусу (в модификации захвата М антител). Описана практика использования разнообразных диагностических наборов, приготовленных с использованием данного подхода, например в ИФА тест-системах, для диагностики заболеваний, вызванных вирусами Западного Нила, Крымской-Конго геморрагической лихорадки, клещевого энцефалита и т.д.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

В. М. Шкинев

Институт геохимии и аналитической химии им. В.И. Вернадского РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: vshkinev@mail.ru
Россия, ул. Косыгина, 19, Москва, 119991

В. Ф. Ларичев

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России

Email: vlaritchev@mail.ru
Россия, ул. Гамалеи, 18, Москва, 123098

Д. А. Трофимов

Институт геохимии и аналитической химии им. В.И. Вернадского РАН

Email: vshkinev@mail.ru
Россия, ул. Косыгина, 19, Москва, 119991

Список литературы

  1. Шеховцова Т.Н., Веселова И.А., Мугинова С.В. Ферментативные методы анализа: новые подходы и области применения // Известия АН наук. Серия химическая. 2007. № 4. С. 583. (Shekhovtsova T.N., Muginova S.V., Veselova I.A. Enzymatic methods of analysis: Novel approaches and applications // Russ. Chem. Bull. 2007. Т. 56. № 4. Р. 606.)
  2. Ahmad M.S., Shah N., Akbar Z., Khan T., Ali A. Simple two-step purification and characterization of peroxidase from Citrullus colocynthis // Nat. Prod. Res. 2024. V. 38. № 19. P. 3374.
  3. Кропанева М.Д., Храмцов П.В., Бочкова М.С., Раев М.Б. Разработка модельного иммунофильтрационного анализа с использованием конъюгата на основе пероксидазы хрена // Российский иммунологический журнал. 2023. Т. 26. № 3. С. 313.
  4. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody a new method of conjugation // J. Histochem. Cytochem. 1974. V. 22. № 12. P. 1084.
  5. Николаевa К.Г., Ермаков С.С., Ермоленко Ю.Е., Наволоцкая Д.В., Оффенхойзерc А., Мурзинаc Ю.Г. Биосенсоры на основе пероксидазы хрена с различными типами нанотрансдъюсеров для определения пероксида водорода |// Журн. аналит. химии. 2021. Т. 76. № 4. С. 350. (Nikolaev K.G., Ermakov S.S., Ermolenko Y.E., Navolotskaya D.V., Offenhäusser A., Mourzina Y.G. Horseradish peroxidase-based biosensors with different nanotransducers for the determination of hydrogen peroxide // J. Anal. Chem. 2021. Т. 76. № 4. Р. 510.)
  6. Гребенникова О.В., Сульман А.М., Шиманская Е.И., Филатова А.Е. Синтез биокаталитических систем с использованием пероксидазы корня хрена // Вестн. Тверского гос. ун-та. Сер. Химия. Физическая химия. 2022. № 2 (48). С. 7.
  7. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля. 1987. М.: Медицина, 1987. С. 436.
  8. Иммуноферментный анализ / Под ред. Т.Г. Нго, Г. Ленхоффа. М.: Мир, 1988. С. 174.
  9. Колясников О.В., Григоренко В.Г., Егоров А.М., Lange S., Schmid R.D. Получение рекомбинантного конъюгата пероксидазы хрена с Fab фрагментом антител с использованием экспрессионной системы Pichia pastoris // Acta Naturae. 2011. Т. 3. № 3 (10). С. 88.
  10. Григоренко В.Г., Андреева И.П., Рубцова М.Ю., Егоров А.М. Рекомбинантная пероксидаза хрена: получение и использование в аналитических целях // Биохимия. 2015. Т. 80. № 4. С. 480.
  11. Медянцева Э.П., Бейлинсон Р.М., Николаенко А.И., Будников Г.К. Пероксидаза хрена – аналитические возможности при определении зеараленона // Журн. аналит. химии. 2022. Т. 77. № 6. С. 522. (Medyantseva E.P., Beilinson R.M., Nikolaenko A.I., Budnikov H.C. Horseradish peroxidase: Analytical capabilities in the determination of zearalenone // J. Anal. Chem. 2022. Т. 77. № 6. Р. 671.)
  12. Трусова И.Н. Дис. … канд. биол. наук. Москва: Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского, 2013.
  13. Мембраны, фильтрующие элементы, мембранные технологии: каталог. Владимир: ЗАО НТЦ “Владипор”.
  14. Твердофазный иммуноферментный метод (ТИФМ, ELISA) / Методические рекомендации. Организация эколого-эпидемиологического мониторинга территории Российской Федерации с целью противоэпидемической защиты населения и войск / Под ред. Д.К. Львова. М., 1995. С. 71.
  15. Calisher C.H., Petzman C.I., Muyh D.J., Parsons M.A. Serodiagnosis of La Cross Virus infections in humans by detections of immunoglobulin M class antibodies // J. Clin. Microbiol. 1986. V. 23. P. 667.
  16. Ларичев В.Ф., Козлова А.А., Сайфуллин М.А., Хуторецкая Н.В., Шкинев В.М., Бутенко А.М. Иммуноферментные тест-системы для диагностики эндемичных для России и завозных тропических арбовирусных инфекций // Эпидемиология и инфекционные болезни. Вирусные и тропические заболевания. 2015. Т. 20. № 6. С. 44.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Мембранная установка для получения компонентов диагностических систем.

Скачать (589KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Спектр раствора образца пероксидазы хрена с концентрацией 1 мг/мл. Условия: ввод 40/10, 4 мМ фосфатный буферный раствор с pH 7.4. Длина волны 220 нм, напряжение 25 кВ, ток 26 мкА, 25оС.

Скачать (297KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Спектр раствора после мембранной очистки. Условия определения: ввод 40/10, 4 мМ фосфатный буферный раствор с pH 7.4. Длина волны 220 нм, напряжение 25 кВ, ток 26 мкА, 25оС (как в случае исходного образца).

Скачать (172KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Данные оценки активности и специфичности конъюгата иммуноглобулина к вирусу Крымской-Конго геморрагической лихорадки в ИФА.

Скачать (98KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Мембранные ячейки для очистки пероксидазы хрена и получения конюгатов.

Скачать (252KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2025