EXPRESSION PROFILE OF microRNA IN MELANOCYTE CELL CULTURE

Abstract

Full Text

Линии меланоцитов в системе in vitro являются оптимальной клеточной моделью и тест-системой для исследования как биологии меланоцитов, так и механизмов развития меланоцитарной неоплазии. Одним из актуальных направлений исследований в этом контексте является поиск кандидатных маркеров патологических состояний, в том числе для целей ранней диагностики меланомы. Исследования последних десятилетий показали, что микроРНК являются важными участниками в контроле многих клеточных процессов в условиях физиологической нормы и при развитии большинства онкозаболеваний. Внеклеточные опухольспецифичные микроРНК могут использоваться в качестве биомаркеров, что позволит расширить объём диагностической информации еще на доклиническом этапе. Являясь структурами с высокой функциональной и информационной нагрузкой, микроРНК способны отражать генетические изменения в клетках организма. По нашему мнению, актуальным являлся анализ профилей микроРНК в корреляции с количеством пассажей при культивировании. В частности, проводили анализ уровня экспрессии пяти видов микроРНК меланоцитов, взятых на разных пассажах культивирования клеточных линий, с помощью количественной полимеразной цепной реакции. Анализировали 1 млн клеток/пассаж с внесением 0,05 пкмоль микроРНК cel-miR-39-3p в качестве экзогенного контроля, по которому рассчитывалась относительная концентрация (RQ). Коэффициент вариации (CV) по RQ по каждому пассажу принимал значение от 6,65 до 47,78 % (среднее значение - 23,95 %). При этом значение CV по микроРНК, вычисленное на шести пассажах, составило: hsa-miR-21-5p - 56,90 %, hsa-miR-1493p - 119,25 %, hsa-miR-150-5p - 117,26 %, hsamiR-155-5p - 69,37 % и hsa-miR-193а-5p - 58,60 %. Данные, полученные нами, отражают неоднородность экспрессии изучаемых микроРНК в культурах меланоцитов на разных пассажах культивирования. Показано, что экспрессия hsa-miR-149-3p является наиболее нестабильной на разных пассажах, что позволяет рассматривать данный вид микроРНК как кандидатный для диагностики генетической нестабильности меланоцитов, в том числе при меланоме.