METHOD OF SILVER IMPREGNATION OF CONNECTIVE TISSUE FIBERS ON A LARGE SEMITHIN SECTIONS FOR LIGHT MICROSCOPY

Abstract

Full Text

Для морфологического анализа тканей, фиксированных в глутаровом альдегиде, дофиксированных в осмиевой кислоте и заключённых в эпоксидные смолы, модифицирован метод импрегнации серебром ретикулярной стромы по С. А. Юриной (1975). Полутонкие срезы синоаурикулярной области сердца собаки площадью 3-4 мм2 изготавливали стеклянным ножом с помощью ультрамикротома Reichert-Jung и монтировали на предметное стекло. Для расправления и лучшего прикрепления к стеклу срезы в капле дистиллированной воды помещали в термостат на ночь при 45 ºС. Минуя этапы депарафинирования, материал обрабатывали 2 мин 0,25 % водным раствором марганцово-кислого калия. Далее срезы обесцвечивали в 10 % растворе щавелевой кислоты под визуальным контролем. Затем погружали на 2 мин в 2 % водный раствор железоаммиачных квасцов. Переносили на 15 мин в аммиачный раствор азотно-кислого серебра и споласкивали аммиачной водой. После каждого этапа обработки срезы тщательно промывали дистиллированной водой. Впоследствии стёкла переносили на 3 мин в 10 % раствор кислого формалина, а затем держали не менее 5 мин под проточной водой. После чего обрабатывали материал 15 мин 0,1 % водным раствором хлорного золота. Споласкивали дистилированной водой, 1 мин держали в 1 % растворе гипосульфита и промывали проточной водой в течение 10 мин. Для длительного хранения полутонкие срезы заключали в эпон и проводили полимеризацию смолы в термостате при температуре 37 ºС в течение 12 ч. В результате окрашивания ретикулярные и незрелые коллагеновые волокна, а также базальные мембраны были чёрного, зрелые коллагеновые волокна - тёмно-коричневого, кардиомиоциты и гладкомышечные клетки артерии синусно-предсердного узла - жёлто-коричневого цвета.