DETERMINING OF THE VON WILLEBRAND FACTOR IN ANIMAL BLOOD SMEARS

Abstract

Full Text

В предыдущем исследовании [Чумасов и др., 2018], посвященном изучению ангиогенеза в сердце крысы, с помощью иммуногистохимического (ИГХ) выявления белка свертываемости крови фактора Виллебранда (фВ) были подтверждены данные о секреторной функции ЭК и показано, что субстратом фВ+ реакции ЭК служат находящиеся в их цитоплазме различные фракции этого белка, представленные в виде многочисленных секреторных гранул и палочковидных органелл - телец Вейбеля- Паладе, а также гранулы тромбоцитов. Были описаны морфологические (реактивные, дистрофические), а также функциональные изменения эндотелиоцитов, оцениваемые по состоянию секреторной активности: синтеза, накопления и выделения в кровь просветов сосудов и полостей предсердий и желудочков фВ+ зернистости. Эти наблюдения побудили нас к разработке способа обнаружения фВ не только в сердце, но и в периферической крови животного с помощью данной ИГХ-реакции. На фиксированных в спирте мазках крови крысы, кошки, собаки, овцы (n=12) проводили ИГХ-реакцию к фВ в соответствии с протоколами, разработанными для ИГХ-выявления различных маркеров Д. Э. Коржевским и соавт. (2012) на парафиновых срезах. Первичные антитела к фВ наносили на одну половину мазка, оставляя вторую в качестве отрицательного контроля. После окончания ИГХ-реакции мазок докрашивали азуром - эозином, после обработки заключали под покровное стекло и проводили анализ с помощью светового микроскопа. Морфологическими критериями выявленного фВ служили присутствующие среди форменных элементов, окрашенные в коричневый цвет конгломераты фВ+ зернистости, а также агглютинированные и свободные тромбоциты. По мнению авторов, данный метод может быть использован для диагностики эндотелиальной дисфункции животных и человека.