MORPHOLOGICAL HETEROGENEITY OF BREAST CARCINOMA CELL CULTURE

Abstract

Full Text

Внутриопухолевая гетерогенность рака молочной железы проявляется не только в экспрессии различных клеточных рецепторов, но и в морфологическом различии клеток. Материалом служил биоптат карциномы молочной железы, полученный от пациентки 74 лет, который в стерильной среде доставляли в лабораторию, где образцы механически измельчали. Фрагменты помещали в среду для диссоциации (4 мг/мл коллагеназы, 1 мг/мл гиалуронидазы, 0,1 % трипсина, DMEM: F-12) и инкубировали около 20 ч в шейкере при 37 ºC и в отсутствие CO2. Далее образец центрифугировали при 80 g, убирали плавающий на поверхности жир. Надосадочную жидкость переносили в другую пробирку и центрифугировали 3 мин при 200 g, а затем снова отбирали, переносили и центрифугировали 5 мин при 350 g. Полученные осадки смешивали, ресуспендировали с трипсином и с раствором Хэнкса с 2 % FBS, центрифугировали 5 мин при тех же оборотах. Затем ресуспендировали с диспазой и ДНКазой и вновь центрифугировали. Полученный осадок разводили с полной средой Mammocult и переносили в 5 мл флакон, предварительно покрытый коллагеном. Для морфологического исследования клетки окрашивали по Паппенгейму, для оценки количества клеток в каждом пассаже использовали автоматический счетчик TC20. Полученные результаты показали, что при нулевом пассаже в 5 мл флаконе присутствуют три конгломерата плотно прилегающих друг к другу клеток веретеновидной формы без отростков. После 1-го пассажа площадь, занимаемая клетками, увеличивалась, начинали появляться фибробластоподобные клетки с 2-3 отростками по всей поверхности флакона. К 3-му пассажу такие клетки занимали всю поверхность флакона, исчезали клетки веретеновидной формы, увеличивалось число отростков; время образования монослоя сократилось вдвое с 10 до 5 сут. Количество клеток увеличивалось на 1,73×105. Заключение. В процессе культивирования клеток, полученных из операционного материала, отмечается увеличение клеток и уменьшение времени формирования монослоя в течение 3 пассажей за счет большого количества фибробластоподобных клеток.