THE USE OF MTT-TEST TO CHARACTERIZE THE VIABILITY OF MULTIPOTENT STROMAL CELLS OF MESENCHYMAL ORIGIN IN CULTURE

Abstract

Full Text

Цель настоящей работы состояла в изучении жизнеспособности мультипотентных стромальных клеток мезенхимального происхождения (МСКМП) в условиях изменения рН среды и при действии L-карнитина. Инкубацию МСКМП проводили при оптимальном значении pH (7,37) и при его модификации (4,0, 5,5 и 9,0) с помощью СО2-независимых буферов. МСКМП засевали в 96-луночный планшет по 100 мкл на лунку и культивировали при одном из вариантов рН в течение 4 ч. Затем в подопытные лунки вносили L-карнитин (от 10-3 до 10-10 М) и инкубировали еще 4 ч, после чего проводили МТТ-тест. Об активности митохондриальных дегидрогеназ судили по интенсивности образования солей формазана. Считывание оптической плотности проводили на ИФА-ридере при длине волны 492 нм по отношению к соответствующему контролю. Результат выражали в единицах оптической плотности. При рН среды 7,37 интенсивность метаболической активности клеток, была оптимальна. При моделировании выраженного ацидоза (рН 4,0 и 5,5) и алкалоза (рН 9,0) она существенно снижалась. Внесение L-карнитина в культуру МСКМП в условиях экспериментального ацидоза (в меньшей степени) и алкалоза (в большей степени) заметно повышало активность митохондриальных дегидрогеназ. Оптимальную эффективность L-карнитин проявил в концентрациях 10-5-10-6 М.