MORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS OF SPERMATOGENESIS IN PATIENTS WITH MALE INFERTILITY

Full Text

В постановке диагноза мужского бесплодия центральное место занимает анализ спермограммы [3]. Диагностический алгоритм дополняют генетическое исследование, определение содержания гормонов в сыворотке крови, УЗИ и другие инструментальные методы исследования [2]. Заключительным этапом обследования мужчины с патоспермией (особенно с олигоастенотератозооспермией и азооспермией) является биопсия яичка с последующей морфологической оценкой сперматогенеза [1, 3, 4]. Правильная интерпретация морфологических изменений в яичке имеет решающее значение в окончательной верификации мужского бесплодия и успешности проведения лечения с использованием вспомогательных репродуктивных технологий. Цель настоящего исследования - изучить морфологические изменения сперматогенного эпителия у пациентов с мужским бесплодием. Материал и методы. Были обследованы 162 пациента в возрасте от 18 до 46 лет (32±14 лет). Критериями включения мужчин в исследование были: возраст от 18 лет, установленный факт бесплодия, отсутствие патологии со стороны половой партнерши. В исследование не включали пациентов с обструктивной формой бесплодия, заболеваниями, передающимися половым путем, варикоцеле, выявленными генетическими и иммунологическими факторами бесплодия, тяжелой сопутствующей патологией на момент обследования. Протокол настоящего исследования был одобрен решением этического комитета медицинского института РУДН (№7 от 22.09.2016). Клиническое обследование выполнялось на базе медицинского центра ООО «ИВА-меди» (Москва). В объем обязательного клинического обследования всех пациентов входили: сбор анамнеза, стандартные клиниколабораторные тесты, определение гормонального профиля, двукратное исследование эякулята [5]. Пациентам с выявленной олигоастенотератозооспемией и азооспермией с целью оценки сперматогенеза и возможности получения сперматозоидов выполнена биопсия яичка - микро ТЕSE (Testicular Sperm Extraction - экстракция сперматозоидов из яичка). У всех пациентов перед циклом ICSI (Intra Cytoplasmic Sperm Injection, внутрицитоплазматической инъекции спермия) выполнялась биопсия яичка. Гистологическое исследование биоптатов проводили на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии медицинского института Российского университета дружбы народов. Материал подвергали фиксации и стандартной гистологической проводке с последующей окраской срезов гематоксилином и эозином. Микропрепараты изучали с помощью светового микроскопа при увеличении ×400 (об. 40, ок. 10). На строго поперечных срезах извитых семенных канальцев (ИСК) оценивали площадь их сечения и подсчитывали количество различных сперматогенных клеток и их сустентоцитов из расчета на один ИСК. Количественный анализ биоптатов проводили с помощью морфометрической установки Motie BA400 (Германия). Полученные цифровые данные обрабатывали на компьютере с использованием программы Statistica v.6.0. При этом проводили сравнение средних значений показателей в ходе однофакторного дисперсионного анализа с последующими попарными сравнениями. Статистически значимыми считали различия при Р<0,05. Результаты исследования. По данным спермограммы, у 61 пациента (37,6%) обнаружена астенозооспермия, у 39 (24%) - тератозооспермия, у 38 (23,4%) - олигоастенотератозооспермия, у 24 (14,8%) - азооспермия. Результаты клинического обследования больных (клинический анализ крови, мочи, анализ секрета простаты, биохимический анализ крови, содержание гормонов в крови, мазок из уретры на инфекции, передаваемые половым путем) не выявили патологических изменений. На этом основании у всех мужчин было констатировано идиопатическое бесплодие. При гистологическом исследовании биоптатов яичка у пациентов с олигоастенотератозоспермией (n=38) выявлена гипоплазия сперматогенного эпителия; площадь ИСК составила 47089±198 мкм2. Количество сперматогоний составило 30,9±0,6, первичных сперматоцитов - 17,3±0,1. Вторичные сперматоциты и сперматиды не визуализировались, сустентоцитов было 11±0,12. Из пациентов с азооспермией (n=24) у 14 (8,6%) была выявлена субтотальная аплазия мужских половых клеток, у 8 (4,9%) отмечены признаки синдрома «только клетки Сертоли», у 2 (1,2%) имелась атрофия ИСК. Площадь ИСК составила 9815±127 мкм2. Количественные показатели содержания сперматогенных клеток в ИСК при азооспермии были: сперматогонии - 16,8±0,3. Первичные, вторичные сперматоциты и сперматиды не визуализировались. Таким образом, у пациентов с азооспермией площадь ИСК и количество сперматогенных клеток значимо ниже, чем у пациентов с олигоастенозооспермией (Р<0,05). Количество сустентоцитов при азооспермии было равно 9,2±0,32, что на 16,3% меньше, чем при олигоастенозооспермии (Р<0,05). Обсуждение полученных данных. Результаты проведенного исследования позволяют констатировать, что у пациентов с тяжелыми нарушениями сперматогенеза уменьшена площадь ИСК и снижено количество половых клеток. Заслуживают внимания полученные данные об уменьшении количества сустентоцитов у пациентов с азооспермией. Поскольку установлено, что сустентоциты играют важную роль в обеспечении сперматогенеза [4], логично предположить, что в результате уменьшения их содержания в ИСК его регуляция нарушается. Полученные нами результаты морфологического исследования сперматогенеза у мужчин с бесплодием согласуются с ранее опубликованными данными [1, 2]. Внедрение в медицинскую практику вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО/ ИКСИ) дает мужчине надежду на генетическое отцовство. У пациентов с патоспермией важна морфологическая оценка сперматогенеза. Так, по данным ряда авторов, у 50-60% пациентов с азооспермией удается получить сперматозоиды, пригодные для ICSI [1, 4]. Показано, что при синдроме «только клетки Сертоли» обнаруживаются 2% ИСК с сохраненными локусами сперматогенеза [1]. J. S. Kalsi, P. Shah, A. Muneer и др. считают, что объективным морфологическим критерием активности сперматогенеза является содержание сперматогоний в ИСК [3]. Наше исследование показывает, что в качестве предиктора сохранности сперматогенеза можно использовать количество сустентоцитов. Это согласуется с полученными нами результатами, свидетельствующими об изменении субпопуляционного состава сперматогенных клеток у пациентов с разной степенью бесплодия. Таким образом, морфологическая оценка сперматогенеза позволяет выявить разные степени его нарушений. С целью прогнозирования уcпешности использования вспомогательных репродуктивных технологий целесообразно осуществлять подсчет субпопуляций сперматогенных клеток и сустентоцитов. Изучение морфологии яичек дает ценную информацию относительно вероятности получения сперматозоидов для ISCI.

About the authors

N. G. Kulchenko

Russian University of Peoples’ Friendship

Email: kle-kni@mail.ru
Department of Histology, Cytology and Embryology, Medical Institute

I. Z. Yeryomina

Russian University of Peoples’ Friendship

Department of Histology, Cytology and Embryology, Medical Institute

References

Supplementary files