THE STRUCTURE OF LYMPHATIC CAPILLARIES OF THE CILIARY BODY OF THE HUMAN EYE

Full Text

До настоящего времени остается дискуссионным вопрос о путях оттока водянистой влаги (ВВ). Согласно имеющимся представлениям, основными структурами глаза, связанными с водной динамикой тканевой жидкости, являются ресничное тело (место продукции тканевой жидкости), трабекулярная сеть и увеосклеральный путь (основные пути оттока тканевой жидкости) [5]. Полагают, что ВВ выделяется эпителиальной выстилкой ресничных отростков и оставляет переднюю камеру в обычных условиях через трабекулярную сеть, венозный синус склеры (шлеммов канал) и далее через водяные вены, эпи-и интрасклеральные венозные сплетения поступает в системный кровоток [7]. При увеосклеральном пути тканевая жидкость течет через основание радужки, через интерстиций ресничного тела в супрахориоидальное пространство, двигаясь в склеру. Было предположено, что жидкость проникает в ткани орбиты периокулярно. Тем не менее, окончательно дренаж жидкости из супрахориоидального пространства не понятен. По мнению ряда исследователей [6], увеосклеральный отток может быть рассмотрен аналогично лимфодренажу тканевой жидкости в других органах, так как в ВВ могут быть белки из ресничной мышцы, ресничных отростков и сосудистой оболочки [7]. Действительно, ВВ, заполняющая переднюю и заднюю камеры глаза, по своему составу похожа на плазму крови. Она способствует обмену веществ в стекловидном теле и сетчатке путем удаления продуктов метаболизма из структур переднего сегмента глаза. В связи с тем, что межклеточная жидкость ресничного тела богата белком, вполне вероятно, что ее дренаж должен осуществляться лимфатической системой [6], так как одной из ее функций является поддержание гомеостаза тканевой жидкости и удаление интерстициальной жидкости и белков. Долгое время считалось, что в структуре глаза отсутствуют лимфатические сосуды [6]. К настоящему времени при использовании иммуногистохимических маркеров эндотелиоцитов лимфатических сосудов выявлены лимфатические сосуды в ресничном теле [2, 9], однако не показана их ультраструктурная организация. Общепринято, что образующаяся тканевая жидкость проходит через рыхлую соединительную ткань вокруг кровеносных сосудов и через строму структур глаза, но не уделяется внимания структуре тканевых несосудистых путей оттока ВВ. Цель настоящего исследования - выявление и изучение ультраструктурной организации путей циркуляции ВВ в ресничном теле глаза человека. Материал и методы. Объектом исследования были фрагменты энуклеированных по медицинским показаниям глаз больных людей (n=5). Для гистологического изучения материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, обрабатывали по стандартной гистологической методике и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином - эозином и проводили иммуногистохимическую реакцию с использованием моноклональных антител к маркерам эндотелиоцитов кровеносных сосудов CD31 и CD34 (Novocasra, Германия), лимфатических сосудов Lyve-1 (DCS ImmunoLine, Германия) и Prox-1 (Covance, Германия), к рецептору фактора роста фибробластов - FGFR (Abcam, Англия). Все этапы реакции: депарафинизацию срезов, демаскировку, инкубацию с первичными антителами и т. д. осуществляли в автоматическом режиме, используя аппарат Benchmark/XT Ventana (Ventana Medical Systems, США). Для исследования в электронном микроскопе образцы глаза размером до 1 мм3 фиксировали в 4% растворе параформальдегида, приготовленном на среде Хенкса, дофиксировали в течение 1 чв 1% растворе ОsO4 на фосфатном буфере (pH 7,4), дегидратировали в этаноле возрастающей концентрации и заключали в эпон (Serva, Германия). Из полученных блоков готовили полутонкие срезы толщиной 1 мкм на ультратоме UC7/FC7 (Leica, Германия/Швейцария), окрашивали толуидиновым синим, изучали под световым микроскопом Leica DME (Leica, Германия) и выбирали необходимые участки тканей для исследования в электронном микроскопе. Из отобранного материала получали ультратонкие срезы толщиной 35-45 нм, контрастировали насыщенным водным раствором уранилацетата и цитратом свинца и изучали в электронном микроскопе JEM 1400 (Jeol, Япония). Результаты исследования. Иммуногистохимическое выявление маркеров эндотелиоцитов кровеносных сосудов CD31 и CD34 показало, что строма ресничного тела равномерно пронизана большим количеством кровеносных капилляров, артериол и венул. Наиболее крупные сосуды были расположены у основания ресничных отростков (рис. 1, а). Различий в экспрессии исследованных маркеров CD34 и CD31 обнаружено не было. При исследовании экспрессии маркеров эндотелиоцитов лимфатических сосудов Lyve-1 и Prox-1 наблюдали подобие трабекул вдоль миоцитов ресничного тела (см. рис. 1, б). На срезах, окрашенных толуидиновым синим, по периферии гладких миоцитов были отмечены структуры, сходные с лимфатическими капиллярами (см. рис. 1, в). Выстилающие их клетки имели вытянутые ядра и узкие цитоплазматические выросты. При электронно-микроскопическом анализе (см. рис. 1, г, д) выявлено, что вдоль гладких миоцитов располагаются клетки с небольшим содержанием органелл в вытянутых узких участках цитоплазмы и имеющие межклеточные контакты типа наложения и открытые межклеточные контакты. Подобные структуры, сходные с лимфатическими капиллярами, были отмечены и в строме ресничного тела (см. рис. 1, д). Обнаруженные вытянутые клетки, образующие каналы, преимущественно вдоль гладких миоцитов ресничного тела экспрессировали маркеры эндотелиоцитов лимфатических сосудов Lyve-1 и Prox-1 (см. рис. 1, б), но не выявлялись при использовании маркеров кровеносных сосудов CD31 и CD34 (рис. 2, а) и не имели базальной мембраны. Они контактировали с коллагеновыми фибриллами (см. рис. 1, г, д) и по структуре были сходны с отростками фибробластов, но не экспрессировали FGFR (см. рис. 2, а) и имели в цитоплазме редкие пузырьки. В ресничном теле были отмечены широкие межтканевые щели, ограниченные коллагеновыми волокнами и фибробластами, что подтвердило иммуногистохимическое выявление FGFR (см. рис. 2, а). Особенно хорошо межтканевые щели выявлялись при электронно-микроскопическом исследовании. Наблюдали интерстициальные пространства различного размера, ограниченные коллагеновыми фибриллами, волокнами, фибробластами и их отростками (см. рис. 2, б). Коллагеновые волокна, фибробласты и их отростки были направлены как вдоль пучков гладких миоцитов, так и к ресничным отросткам. Обсуждение полученных данных. До настоящего времени продолжаются споры относительно существования и классификации лимфатических сосудов в структурах глаза человека [8]. Тем не менее, при применении иммуноэлектронного метода с использованием антител к эндотелию лимфатических сосудов, меченных золотом, а также при иммуногистохимической реакции и иммунофлюоресцентном методе выявления антител к подопланину и Lyve-1, были показаны лимфатические сосуды в ресничном теле глаза человека [2, 9]. Авторы описывали данные структуры как образующие трабекулы в ресничном теле, расположенные в виде узких полосок вдоль ресничной мышцы, иногда находящиеся отдельно в строме ресничного тела. В результате электронно-микроскопических исследований были обнаружены плоские клетки с тонкими цитоплазматическими выростами [2]. Они не экспрессировали маркеры эндотелия кровеносных сосудов (CD34), не имели базальной мембраны [9] и были охарактеризованы как лимфатические каналы. Им соответствуют выявленные нами в ресничном теле структуры, которые можно рассматривать как аналоги лимфатических капилляров, имеющие органоспецифические особенности. Лимфатические капилляры ресничного тела собирают тканевую жидкость и продукты метаболизма для направленного транспорта в лимфатическую систему, а затем в кровоток. К тому же, было показано [9], что через 15 мин после введения люминесцентных наносфер в переднюю камеру глаза овец они выявлялись в просвете Lyve-1+-лимфатических каналов ресничного тела. Через 4 ч после инъекции метку обнаруживали в шейном, заглоточном и поднижнечелюстном лимфатических узлах [9]. Эти данные указывают на присутствие лимфатических путей в ресничном теле глаза человека и на то, что жидкость и растворенные в ней вещества удаляются, по меньшей мере частично, через лимфатическую систему [6]. Предполагается, что при нарушении трабекулярной сети и усилении увеосклерального оттока будет происходить возрастание дренажа с участием лимфатической системы. Если обычный отток в сосудистой системе будет заблокирован, то более эффективным для дренажа ВВ окажется увеосклерально-лимфатический путь [6]. Нами также было показано наличие в ресничном теле широких интерстициальных пространств - тканевых щелей, ограниченных коллагеновыми волокнами и фибробластами. По терминологии M. Fӧldi [3], тканевые щели, содержащие тканевую жидкость, являются путями несосудистой микроциркуляции в интерстиции - прелимфатиками. Они находятся вблизи кровеносных сосудов, располагаются экстра-или интраадвентициально, либо окружают лимфатические капилляры [4]. По-видимому, тканевая жидкость в ресничном теле течет по интерстициальным пространствам - прелимфатикам. Согласно нашим представлениям о лимфатическом регионе, включающем несосудистые пути движения тканевой жидкости - прелимфатики, лимфатические сосуды и регионарные лимфатические узлы [1], можно говорить о лимфатическом регионе глаза. В структуре последнего, на основании полученных данных, мы выделяем первые 2 звена - тканевые щели - прелимфатики и лимфатические каналы, аналоги лимфатических капилляров, ресничного тела. Далее следуют лимфатические сосуды мягких покровов головы, 3-м звеном лимфатического региона являются лимфатические узлы головы и шеи. Полученные результаты внушают мысль о существовании двух дренажных механизмов глаза. Первый - представлен трабекулярной сетью, венозным синусом склеры и водяными венами, сбрасывающими водное содержимое непосредственно в кровоток. Второй механизм включает все 3 звена стандартного лимфатического региона [1]: тканевые щели ресничного тела (прелимфатики), органоспецифические лимфатические капилляры ресничного тела и лимфатические сосуды мягких покровов головы, регионарные лимфатические узлы головы и шеи.

About the authors

Yu. I. Borodin

Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology

Email: lympha@niikel.ru
Laboratory of Ultrastructural Research

N. P. Bgatova

Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology

Email: n_bgatova@ngs.ru
Laboratory of Ultrastructural Research

V. V. Chernykh

S. N. Fyodorov «Eye Microsurgery» Interbranch Scientific and Technical Complex

Email: rimma@mntk.nsk.ru

A. N. Trunov

S. N. Fyodorov «Eye Microsurgery» Interbranch Scientific and Technical Complex

Email: trunov1963@yandex.ru

A. A. Pozhidayeva

Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology

Email: nastpoj@mail.ru
Laboratory of Ultrastructural Research

V. I. Konenkov

Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology

Email: vikonenkov@gmail.com
Laboratory of Ultrastructural Research

References

Supplementary files