Effect of «Oxytocin» on the expression of the PAX6 gene in experimental corneal erosion

Abstract

Full Text

Изучено влияние препарата «Окситоцин» на экспрессию гена PAX6 при экспериментальной эрозии роговицы. Исследование проведено на кроликах. Эрозию роговицы выполняли по методу С.Hanna, J. E.O’Brien (1960). Для оценки экспрессии генов образцы роговицы хранили в фиксаторе IntactRNA (Евроген), при +4 ºС не более 24 ч. мРНК выделяли с помощью реагента ExtractRNA (Евроген). Относительное содержание мРНК оценивали методом электрофореза. РНК растворяли в деионизованной воде, обрабатывали с помощью DNaseI (SkyGen). Обратную транскрипцию проводили с помощью обратной транскриптазы MMLV (Евроген). Для real-timePCR использовали праймеры на гены «домашнего хозяйства» HPRT, RPL5 и целевой ген PAX6, сконструированные с помощью программы VectorNTI и проверенные в базе данных GENBANK. Экспрессия гена PAX6 в строме роговицы на 4-е сутки была в 2,509 раза больше в образцах 1-й группы животных с эрозией роговицы, которым инстиллировали ципромед 0,3% 3 раза в день, по сравнению с контрольными животными с интактной роговицей. На 8-е сутки экспрессия гена PAX6 в образцах 1-й группы животных была также выше в 6,543 раза. В образцах второй группы животных с эрозией роговицы, которым инстиллировали ципромед 0,3% и раствор окситоцина 3 раза в день, экспрессия гена PAX6 на 4-е и 8-е сутки была низкой и практически не отличалась от контроля. В клетках эпителия роговицы уровень экспрессии гена PAX6 был выше в 5,574 раза в образцах 2-й группы животных, и примерно одинаковым на всем протяжении эксперимента по сравнению с контролем.