MORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS OF THE ALLANTOIC PLACENTA IN RATS WITH EXPERIMENTAL LIVER DAMAGE

Full Text

Актуальность настоящего исследования определяется важной ролью материнского здоровья в решении проблемы воспроизводства полноценного потомства. В структуре экстрагенитальных заболеваний особое место, в силу своей распространенности, занимают болезни гепатобилиарной системы. Экспериментально ранее было показано [2, 3], что патология гепатобилиарной системы матери обусловливает рождение физиологически незрелого потомства, что нашло свое проявление в нарушении морфофункционального становления систем жизнеобеспечения. Вместе с тем, является постулатом положение о том, что состояние плаценты во многом определяет оптимальное развитие плода. Однако особенности структурно-функциональных изменений в плаценте при хроническом поражении печени матери до сих пор до конца не изучены. Цель настоящего исследования - анализ морфологических особенностей аллантоидной плаценты крысы при экспериментальной хронической патологии печени. Материал и методы. Исследование выполнено на белых лабораторных крысах линии Вистар с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных». У 3-месячных половозрелых животных моделировали хроническое поражение печени: у одних (лекарственная группа - ЛГ) его создавали путем 2-кратного (в течение 2 сут) интрагастрального введения парацетамола в дозе 2,5 г/кг массы тела [4], у других (токсическая группа - ТГ) - вводили D-галактозамин 1-кратно внутрибрюшинно в дозе 250 мг/кг массы тела [5]. О развитии патологического процесса в печени экспериментальных животных судили на основании морфологических изменений (очаговые бионекротические изменения гепатоцитов, их дискомплексация, периваскулярная лимфогистиоцитарная инфильтрация, гипертрофия и гиперплазия звездчатых макрофагов - клеток Купфера), биохимических критериев (повышение концентрации билирубина, аланин-и аспартатаминотрансфераз) и высокого титра печеночных аутоантител (1:320 и 1:640). Через 7 сут после введения парацетамола и D-галактозамина самок подсаживали к интактным самцам. Контрольную группу (КГ) составили интактные животные. В каждой экспериментальной группе было по 15 животных. Объектом исследования служила гемохориальная плацента крыс интактной и подопытных групп на 21-е сутки беременности, начало которой устанавливали по наличию сперматозоидов во влагалищном мазке. От одного животного в исследование включали одну плаценту. Материал фиксировали в 10% формалине. Серийные гистологические срезы (10 предметных стекол по 8 срезов на каждом от одной плаценты одной крысы) толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином - эозином, железным гематоксилином по Вейгерту. Для оценки морфофункционального состояния плаценты использовали общепринятые критерии: абсолютные площади лабиринтной и базальной зон, материнских синусоидов базального отдела, материнских и фетальных капилляров лабиринта. Определение абсолютной площади осуществляли с помощью инструмента «Объект сплайном» аппаратнопрограммного комплекса ВидеоТест «Морфология» 5.0, с помощью которого выделяли границы исследуемых объектов. Для оценки пролиферативной активности плацентарных клеток различных компартментов применяли иммуноморфологический метод с использованием антител к антигену Ki-67 (Novocastra, США). Подсчитывали количество иммунопозитивных клеток на условной единице площади (50×104 мкм2). В специальной серии проведены исследования влияния хронической патологии печени матери на проницаемость плацентарного барьера. Ее оценивали с помощью 3% раствора трипанового синего на 0,9% водном растворе хлорида натрия, который вводили внутрибрюшинно на 20-е сутки беременности подопытным и контрольным (интактным) животным в количестве 3 мл. Подсчитывали количество гранул красителя в цитоплазме синцитиотрофобласта и цитотрофобласта на условной единице площади (2088 мкм2). Полученные цифровые данные обрабатывали с использованием программы Statistica 6.0 (Statsoft). Учитывая небольшую выборку животных, значимость полученных результатов определяли при помощи непараметрического метода - критерия Манна-Уитни. Результаты исследования. Основными структурными компонентами гемохориальной плаценты у грызунов являются базальная зона и лабиринтный отдел. Полученные данные свидетельствуют о том, что в ТГ уменьшена абсолютная площадь лабиринтного отдела до 173 641±956 мкм2 (в КГ - 197 947±1743 мкм2) (P<0,05). Более существенно изменялась площадь лабиринтного отдела плаценты в ЛГ снижением этого показателя до 168 179±292 мкм2 (P<0,05). При этом увеличивалась абсолютная площадь базального отдела плаценты в обеих подопытных группах. Так, в КГ она составляла 68 960±501 мкм2, в то время как в ЛГ - 104 529±2006 мкм2 (P<0,05), а в ТГ - 113 231±394 мкм2 (P<0,05). У крыс ЛГ в базальной зоне плаценты обнаружено снижение абсолютной площади материнских синусоидов c 7677±102 до 5236±54 мкм2 (P<0,05), в то же время в ТГ она равнялась 3757±48 мкм2 (P<0,05), что может свидетельствовать о недостаточном кровенаполнении плаценты. Кроме того, снизилась площадь материнских лакун и фетальных капилляров лабиринта, между которыми осуществляется обмен веществ. Так, площадь материнских лакун лабиринта в КГ составила 76 650±539 мкм2, в то время как в плаценте животных ЛГ этот показатель был равен 65 968±605 мкм2 (P<0,05), а в ТГ снизился до 65 700±389 мкм2 (P<0,05). Площадь фетальных капилляров в ЛГ (47 315±607 мкм2) и ТГ (50 357±1273 мкм2) значимо (P<0,05) снизилась по сравнению с таковой в КГ (57 614±688 мкм2) При исследовании проницаемости мембран плацентарного барьера получены данные, свидетельствующие о ее повышении. Так, в ЛГ количество гранул трипанового синего на условной единице площади в синцитиотрофобласте составило 88±8, в цитотрофобласте - 56,2±2,8. У животных ТГ в синцитиотрофобласте обнаружено 107±5, а в цитотрофобласте - 99±6 гранул. При этом в плаценте у животных ЛГ гранулы красителя обнаружены не были ни в синцитиотрофобласте, ни в цитотрофобласте (рисунок). Анализ пролиферативной активности плацентарных клеток различных компартментов выявил изменения количества Ki-67-позитивных клеток на единице площади в обеих подопытных группах по сравнению с КГ. Так, количество иммунопозитивных вторичных гигантских клеток трофобласта базальной зоны в плаценте снизилось с 0,10±0,010 до 0,030±0,010 у крыс ЛГ (P<0,05) и до 0,060±0,010 у крыс ТГ (P<0,05). Кроме того, уменьшилось количество Ki-67иммунопозитивных клеток спонгиотрофобласта: так, в ЛГ до 1,70±0,010 и 1,80±0,020 в ТГ (в группе контроля - 2,10±0,06). Также обнаружено значимое снижение количества иммунопозитивных клеток синцитиотрофобласта лабиринта - с 12,2±0,4 в КГ до 9,30±0,10 в ЛГ и 11,70±0,12 в ТГ. Значимое изменение количества Ki-67позитивных клеток обнаружено в цитотрофобласте плаценты у животных ЛГ. Так, если в контроле данный показатель составил 13,30±0,12 клеток, то в ЛГ - 9,40±0,10. В то же время, снижение количества иммунопозитивных клеток в ТГ было незначимым - 10,90±0,04 клеток. Обсуждение полученных данных. Во время беременности формируются механизмы адаптации и компенсации, направленные на вынашивание и рождение здорового ребенка, образуется система мать-плод, интегральным компонентом которой является плацента [6]. В то же время, для нормального развития беременности необходимо полноценное структурно-функциональное взаимодействие плода с плацентой, которое осуществляется, прежде всего, за счет единой гемоциркуляторной системы - фетоплацентарного круга кровообращения [8]. В результате многочисленных исследований установлена абсолютная зависимость плаценты, с одной стороны, от возрастающих потребностей развивающегося плода, а с другой - от исходных возможностей и функциональных резервов материнского организма [8]. В связи с этим не вызывает сомнений, что патогенетические основы хронической фетоплацентарной недостаточности связаны, прежде всего, со структурными изменениями в плаценте [9]. Логично предположить, что выявленные нами морфологические изменения в плаценте самок крыс с экспериментальным поражением печени (уменьшение удельного объема лабиринта, гигантских клеток, материнских синусоидов базальной зоны, материнских лакун, фетальных капилляров и трофобласта лабиринта) могут свидетельствовать о развитии плацентарной недостаточности. В пользу этого свидетельствует также установ ленное нами нарушение у подопытных животных фетоплацентарного кровообращения (уменьшение суммарной площади сосудистого русла). Можно заключить, что компенсаторно-приспособительные реакции плода реализуются в том числе на уровне плаценты [10]. В связи с этим логично предположить, что выявленные нами морфологические изменения в плаценте у подопытных животных обусловливают развитие хронической гипоксии плода, которая приводит к развитию полиорганной дисфункции, в том числе систем жизнеобеспечения [1, 7], определяющих диапазон компенсаторно-приспособительных реакций и, как следствие, формированию физиологической незрелости потомства.

About the authors

G. V. Briukhin

South Ural State Medical University, Chelyabinsk

R. K. Abdil’din

Chelyabinsk State University

Email: ruslan.abdildin@mail.ru

References

Supplementary files