ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ И КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ, АССОЦИИРОВАННОЙ С КОНЪЮНКТИВОЙ, У СВИНЕЙ

Полный текст

Лимфоидная ткань, ассоциированная с конъюнктивой (ЛТАК), сходна с лимфоидной тканью пищеварительного тракта и бронхов [9, 10]. Она лучше исследована у человека и кролика [6-8], чем у других видов. У человека она содержит все компоненты, необходимые для выработки полноценного иммунного ответа [6, 7, 10]. Сравнительное гистологическое исследование конъюнктивы у 15 видов млекопитающих установило наличие в ней лимфоидных узелков у кроликов, хорьков, морских свинок, кошек, собак, свиней, овец, коров, макак-резусов, бабуинов и людей, причем их количество зависело от вида животного. В конъюнктиве у мышей и крыс лимфоидная ткань обнаружена не была [3]. У мышей она имелась только в мигательной перепонке [10]. При исследовании ЛТАК иммуногистохимическими методами в ней обнаружены IgA-, а также в небольшом количестве - IgM-позитивные плазматические клетки [7]. В настоящее время отсутствуют исследования, посвященные морфологическим изменениям ЛТАК в зависимости от возраста животных. Цель настоящей работы - исследование структуры ЛТАК у свиней и выявление в ней популяций лимфоцитов, а также бластных клеток в возрастном аспекте. Материал и методы. Материал для исследования брали во время забоя поросят и свиней в убойном пункте, расположенном недалеко от г. Бишкек. После забоя 18 голов поросят и свиней все их органы были подвергнуты детальному осмотру для исключения каких-либо патологических изменений. Объектами исследования служили конъюнктивы нижных и верхних век глаз 18 голов поросят и свиней крупной белой породы, в том числе 3 головы - 5-7-суточные поросята (все самки), 3 головы - 2-месячные поросята (2 самца, 1 самка), 6 голов - 6-месячные подсвинки (4 самки, 2 самца) и 6 голов - 12-месячные свиньи (4 самки, 2 самца). При взятии материала соблюдали общепринятые требования международной Хельсинкской декларации о гуманном отношении к подопытным животным. Сбор материала и часть гистологических исследований проведены на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы, гистологии и патологии Кыргызского национального аграрного университета им. К. И. Скрябина, а часть гистологических, гистохимических и иммуногистохимических исследований - в Институте ветеринарной патологии факультета ветеринарной медицины Гиссенского университета им. Юстуса Либиха (Германия) при грантовой поддержке ДААД (Германская Служба Академических Обменов). Верхние и нижние веки глаз поросят и свиней сразу же после забоя и осмотра фиксировали в 4% водном растворе нейтрального формалина, после чего заливали в парафин обычным способом. Готовили серийные срезы толщиной 5 мкм на ротационном микротоме RM 2255 (Leica Biosystems Nussloch, Германия). Гистологические препараты окрашивали гематоксилином - эозином и ставили ШИК-реакцию для выявления бокаловидных клеток и докрашивали красителем Папаниколау (1:10). Для выявления Т-, В-лимфоцитов и оценки пролиферации клеток использовали иммуногистохимические реакции. Применяли следующие первичные антитела и стандартные иммуногистохимические методы: поликлональные кроличьи антитела к маркеру Т-лимфоцитов CD3 (DakoCytomation, Дания); моноклональные мышиные антитела к маркеру В-лимфоцитов CD79a - очищенные (Acris Antibodies GmbH, Германия); моноклональные мышиные антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) (DakoCytomation, Дания). Для визуализации реакций применяли: 1) АВС-метод - с использованием авидин-биотиновых комплексов; 2) пероксидазно-антипероксидазный (ПАП) метод с 3,3-диамино-бензидин-тетрагидрохлорид дигидратом (ДАБ) (Fluka, Германия). В ходе проведения иммуногистохимических реакций параллельно осуществляли отрицательные контроли. Иммуногистохимические исследования проводили согласно протоколам фирм-производителей с применением специального планшета Coverplates, Shandon Racks, Thermo Scientific (Германия), предназначенного для ручного иммуногистохимического окрашивания. При положительной реакции CD3-позитивные клетки (Т-лимфоциты), CD79aпозитивные клетки (В-лимфоциты), клетки в состоянии пролиферации окрашивались в коричневый цвет. После проведения иммуногистохимических реакций срезы докрашивали гематоксилином. Препараты просматривали под бинокулярным микроскопом Nikon ECLIPSE 80 i с экраном (Nikon, Германия). Результаты исследования. Конъюнктива у 5-7-суточных поросят состоит из эпителиального и субэпителиального слоев (рис. 1, а). Эпителиальный слой представлен многослойным эпителием, состоящим из эпителиоцитов цилиндрической и кубической формы, а также бокаловидными клетками (см. рис. 1, б). Единичные лимфоциты встречаются между эпителиоцитами и в субэпителиальной соединительной ткани (см. рис. 1, а). Вокруг отдельных сосудов субэпителиального слоя и в их просвете встречаются единичные лимфоциты. Лимфоидные узелки в субэпителиальной соединительной ткани конъюнктивы отсутствуют. Иммуногистохимические исследования показали, что единичные CD3-позитивные лимфоциты располагаются в субэпителиальном слое, вокруг и в просвете отдельных сосудов и между эпителиоцитами конъюнктивы (см. рис. 1, в), тогда как CD79a-позитивные лимфоциты отсутствуют. У 2-месячных поросят незначительное количество лимфоидной ткани наблюдается в основном в тарзальной зоне конъюнктивы верхних и нижних век, а в своде и бульбарной зоне конъюнктивы лимфоидной ткани нет. В субэпителиальной соединительной ткани встречаются лимфоциты и плазматические клетки. Вокруг отдельных сосудов отмечается небольшое скопление лимфоцитов и плазматических клеток. Встречаются интраэпителиальные лимфоциты (рис. 2, а). Бокаловидных клеток в конъюнктиве у 2-месячных поросят больше, чем у 5-7-суточных поросят (см. рис. 2, б). Иммуногистохимические исследования показали, что популяция лимфоцитов в конъюнктиве у 2-месячных поросят представлена CD3-позитивными лимфоцитами (см. рис. 2, в) и CD79a-позитивными лимфоцитами (см. рис. 2, г). Вокруг отдельных сосудов субэпителиального слоя отмечается небольшое скопление CD3-позитивных лимфоцитов (см. рис. 2, в). Интраэпителиальные лимфоциты представлены CD3-позитивными клетками. У свиней 6- и 12-месячного возраста субэпителиальная ткань конъюнктивы содержит как лимфоциты и плазматические клетки, так и типичные лимфоидные узелки (рис. 3, а), которые в основном располагаются в тарзальной зоне конъюнктивы верхних и нижних век, а в своде и бульбарной зоне конъюнктивы имеется незначительное количество лимфоидных узелков или они единичны.Всубэпителиальном слое конъюнктивы лимфоидные узелки обычно единичны, но они могут располагаться и в виде мелких групп (обычно по 2-3) (см. рис. 3, в). Отдельные лимфоидные узелки содержат центр размножения. Лимфоидные узелки и лимфоидные клетки тесно взаимосвязаны с эпителием конъюнктивы, где создают ЛТАК (см. рис. 3, а). В субэпителиальном слое конъюнктивы и вокруг лимфоидных узелков встречаются венулы с высоким эндотелием, вокруг которых выявляются лимфоциты (см. рис. 3, б). В участках конъюнктивы, где под эпителием располагаются лимфоидные узелки, он истончен и инфильтрирован лимфоцитами, а количество бокаловидных клеток уменьшено, либо они отсутствуют (см. рис. 3, в). Иммуногистохимические исследования показали, что субэпителиальная ткань содержит как CD3-позитивные (см. рис. 3, г), так и CD79a-позитивные лимфоциты, из которых в основном состоят лимфоидные узелки (см. рис. 3, д). В центре размножения отдельных лимфоидных узелков отмечена пролиферация лимфобластов (см. рис. 3, е). Большинство CD3позитивных лимфоцитов располагаются вокруг лимфоидных узелков (см. рис. 3, г) или в межузелковых зонах. ЛТАК имеет В-зависимые зоны (лимфоидные узелки), состоящие из CD79aпозитивных лимфоцитов, иТ-зависимые зоны, расположенные вокруг лимфоидных узелков, или межузелковые зоны, состоящие из CD3-позитивных лимфоцитов. Обсуждение полученных дан ных. ЛТАК у свиней имеет такое же строение, как лимфоидная ткань, ассоциированная с другими слизистыми оболочками организма [9]. Для нее характерна специфическая структура, которая представлена конъюнктивальным эпителием, лимфоидными узелками и клетками в субэпителиальном слое. Проведенные морфологические исследования показали, что указанные структуры ЛТАК тесно взаимосвязаны между собой. Эта структура у свиней морфологически и по расположению имеет сходство с ЛТАК у человека [6, 7] и различных видов животных [2, 3, 5, 8, 10]. Ранее было показано, что в конъюнктиве у свиней имеются лимфоидные узелки [3]. Нами впервые исследована структура ЛТАК у свиней и описаны возрастные изменения в ней. Гистологически ЛТАК у поросят в возрасте 5-7 сут морфологически сходна с таковой у новорожденных кроликов и индеек [4]. Используя иммуногистохимические методы, нами впервые у поросят и свиней исследованы популяция лимфоцитов и пролиферация лимфобластов в ЛТАК в возрастном аспекте. Первичные антитела к маркерам CD3, CD79аи PCNA, соответственно, дали положительные реакции с Т-, В-лимфоцитами и бластными клетками. ЛТАК у свиней содержала CD3-позитивные лимфоциты, CD79а-позитивные лимфоциты, но в возрасте 5-7 сут CD79а-позитивные лимфоциты отсутствовали. В центрах размножения лимфоидных узелков ЛТАК была отмечена пролиферация лимфобластных клеток. Аналогичные иммуногистохимические исследования, направленные на выявление Т-иВ-лимфоцитов в ЛТАК с применением соответствующих первичных поли-и моноклональных антител, были проведены у человека [6-8], кошек [5, 6], грызунов [1] и бабуинов [2]. Места расположения Т-иВ-лимфоцитов в ЛТАК у свиней аналогичны таковым у отмеченных выше видов. Таким образом, совокупность полученных результатов морфологического исследования ЛТАК у свиней позволяет заключить: 1) ЛТАК у свиней в целом имеет структуру, подобную лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистыми оболочками у животных. Также ей свойственна специфическая структура, включающая в себя лимфоидные клетки и узелки, которые ассоциированы с конъюнктивальным эпителием; 2) у новорожденных поросят ЛТАК слабо развита и представлена единичными лимфоцитами. В процессе роста и развития поросят идет поэтапное формирование ЛТАК, которое характеризуется постепенным увеличением количества лимфоидных клеток и их скоплением, а также образованием лимфоидных узелков; 3) ЛТАК у свиней содержит Т-иВ-лимфоциты, тогда как в ЛТАК у поросят в возрасте 5-7 сут В-лимфоциты отсутствуют. В центрах размножения лимфоидных узелков ЛТАК отмечена пролиферация лимфобластных клеток; 4) клеточный состав лимфоидных узелков представлен В-лимфоцитами. Большинство Т-лимфоцитов расположены вокруг лимфоидных узелков или в межузелковых зонах ЛТАК; 5) ЛТАК у свиней является местной иммунной системой, которая содержит все структуры и клетки, необходимые для формирования иммунной реакции и защиты парокулярных тканей. Вклад авторов: Концепция и дизайн исследования: З.К.К., К.С.А. Сбор и обработка материала: З.К.К., А.Ш.И., М.Р. Статистическая обработка данных: Анализ и интерпретация данных: З.К.К., К.С.А., А.Ш.И. Написание текста: З.К.К., К.С.А., А.Ш.И., М.Р. Авторы сообщают об отсутствии в статье конфликта интересов.

Об авторах

Алмазбек Шукурбаевич Иргашев

Кыргызский национальный аграрный университет им. К. И. Скрябина

Email: irgasheva@mail.ru
кафедра ветеринарно-санитарной экспертизы, гистологии и патологии 720005, Кыргызская Республика, г. Бишкек, ул. Медерова, 68

Закия Кабылбаевна Каландарова

Кыргызский национальный аграрный университет им. К. И. Скрябина

Email: zakiaoph@mail.ru
кафедра ветеринарно-санитарной экспертизы, гистологии и патологии 720005, Кыргызская Республика, г. Бишкек, ул. Медерова, 68

Кубан Султанович Арбаев

Кыргызский национальный аграрный университет им. К. И. Скрябина

кафедра ветеринарно-санитарной экспертизы, гистологии и патологии 720005, Кыргызская Республика, г. Бишкек, ул. Медерова, 68

Манфред Райнахер

Институт ветеринарной патологии, Университет Юстуса-Либиха

Email: manfred.reinacher@vetmed.uni-giessen.de
35392, Германия, г. Гиссен, ул. Франкфуртер, 96

Список литературы

Дополнительные файлы