ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ ТИМУСА И КРАНИАЛЬНЫХ БРЫЖЕЕЧНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ У НОВОРОЖДЁННЫХ КРЫС ПОСЛЕ ПРЕНАТАЛЬНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ЭТАНОЛА

Полный текст

Этанол относится к числу наиболее опасных химических веществ, обладающих эмбрио-и фетотоксическим свойством. Однако связь между неонатальной патологией и женским алкоголизмом установлена только во второй половине XX в., когда алкогольный синдром плода был выделен в отдельную нозологическую единицу. Одним из клинических проявлений этого синдрома является сниженная масса тела [13, 16, 18], но в экспериментах на животных такая закономерность прослеживается не всегда [14]. У исследователей особый интерес вызывают нарушения в иммунной системе, возникающие в результате пренатальной алкогольной интоксикации [5, 7, 12, 14, 17]. Большинство авторов отмечают снижение абсолютной и относительной массы тимуса у новорожденных крыс после пренатального воздействия этанола. Тем не менее, нет единого мнения об изменениях в клеточном составе тимуса. Так, по данным Э. А. Надырова [5], при пренатальной этаноловой интоксикации количество всех видов лимфоцитов уменьшается, а ретикулярных эпителиоцитов (РЭ), делящихся и разрушающихся клеток, — увеличивается; на электронно-микроскопическом уровне отмечаются деструктивные процессы как в лимфоидном, так и эпителиальном компонентах тимуса. Результаты исследования В. Э. Торбек [14] показали, что после пренатального воздействия этанола в тимусе у новорожденных крысят происходит снижение числа малых и больших лимфоцитов, митотически делящихся клеток, а доля РЭ, макрофагов и разрушающихся клеток возрастает; ультраструктура большинства лимфоцитов не изменена, а РЭ — нарушена. Одной из причин, объясняющей эти расхождения, может быть разная длительность прегравидарной этаноловой интоксикации самок. Так, в первой из упомянутых работ самки подвергались воздействию этанола только во время беременности, а во второй — на протяжении 2 мес до ее наступления. В проведенных ранее исследованиях краниальных брыжеечных лимфатических узлов (КБЛУ) у новорожденных крыс, родившихся у матерей, подвергавшихся воздействию этанола, были обнаружены изменения их количества, площади, степени дифференцировки паренхимы, а также клеточного состава. При этом выраженность этих изменений зависела от длительности прегравидарного воздействия этанола на самок, но не всегда с ней коррелировала [7, 12]. Как известно, тимус во многом определяет становление вторичных иммунных органов [11], а у новорожденных животных выявлены лимфатические узлы с разной степенью дифференцировки паренхимы [7, 12]. Комплексная оценка нарушений в первичных и вторичных органах иммунной системы, возникающих под влиянием этанола в организме зародыша, и их взаимосвязь с длительностью этаноловой интоксикации матери в литературе [8, 9] представлена недостаточно. В связи с изложенным, целью настоящего исследования было изучение особенности строения тимуса и КБЛУ у новорождённых крыс, родившихся у самок, подвергавшихся воздействию этанола во время беременности и до нее. Материал и методы. Объектом исследования явились 116 крыс обоего пола, родившиеся у 25 беспородных белых самок в возрасте 7 мес. 1-ю экспериментальную группу составили новорожденные животные (n=34), родившиеся у самок, получавших 15% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости во время беременности; во 2-ю экспериментальную группу вошли новорожденные крысы (n=38), матери которых получали 15% раствор этанола в течение 1 мес до наступления беременности и на всем ее протяжении. Контролем служили новорожденные животные (n=44), полученные от интактных самок. Новорожденных животных декапитировали под наркозом (пары хлороформа). Исследования проводили с соблюдением приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г. и приказа Министерства высшего и среднего специального образования СССР от 13.11.1984 г. «О правилах проведения работ с использованием экспериментальных животных». Для изучения тимуса и КБЛУ у контрольных и экспериментальных новорожденных крыс использовали комплекс морфометрических и классических гистологических методов исследования. Измерение массы тела животных и их тимуса производили на электронных весах (Acculab, США). Абсолютную массу тимуса определяли после его предварительного препарирования от прилежащих тканей под бинокулярной лупой МБС-2. Относительную массу тимуса вычисляли как отношение его абсолютной массы к массе тела. Тимус и КБЛУ фиксировали в 10% нейральном формалине и после стандартной проводки заливали в парафин. Для изучения патоморфологических изменений и морфометрического исследования КБЛУ и тимуса изготавливали серийные гистологические срезы и окрашивали гематоксилином – эозином. Все препараты изучали при помощи светового микроскопа (МИКРОМЕД-3, Россия) со съемной камерой (LEVENHUK C310, КНР). На продольных срединных срезах с использованием программы «Image J» определяли количество и общую площадь КБЛУ, а также отдельно число и площадь сечения узлов, не имеющих корково-мозговой дифференцировки (КМД), с КМД и первичными лимфоидными узелками (ПЛУ). Размеры структурно-функциональных зон тимуса и КБЛУ определяли в 10 полях зрения. Клеточный состав тимуса и КБЛУ (абсолютное и относительное содержание клеток) определяли на срезах, окрашенных азуром II – эозином (об. 100, ок. 10) на единице площади среза 15 000 мкм2. Количество тимусных телец подсчитывали в каждой дольке. Полученные цифровые данные обрабатывали с использованием статистического пакета Microsoft Excel, рассчитывали среднее арифметическое значение и его стандартную ошибку, значимость различий определяли по t-критерию Стьюдента; различия считали значимыми при Р≤0,05. Результаты исследования. Масса тела новорожденных крыс, развивавшихся в физиологических условиях, составила 5,72±0,21 г. Статистически значимое уменьшение этого показателя на 10% наблюдалось только у новорожденных крыс 1-й экспериментальной группы. Абсолютная и относительная масса тимуса значимо снижалась (в 2,1 и 1,8 раза соответственно) у животных 2-й экспериментальной группы (табл. 1). Клеточный состав коркового вещества (КВ) и мозгового вещества (МВ) тимуса у новорожденных крыс контрольной группы был представлен преимущественно РЭ, большими, средними и малыми лимфоцитами, а также делящимися и дегенерирующими клетками (табл. 2). У новорожденных животных экспериментальных групп наблюдалось уменьшение общего количества клеточных элементов на единице площади среза тимуса, которое в контроле в КВ составляло 108±4, ав МВ — 81,4±2,4. При этом, у животных 1-й группы общее число клеток на срезах в КВ и МВ тимуса уменьшалось в 1,1 раза, а 2-й группы — в 1,3 и 1,2 раза соответственно (Р≤0,05). Изменения соотношений различных клеточных элементов заключались в прогрессивном снижении доли всех видов лимфоцитов и клеток с фигурами митоза на фоне возрастания содержания РЭ и дегенерирующих клеток (см. табл. 2). У новорожденных крыс контрольной группы в дольке органа определялись тимусные тельца в количестве 2,31±0,09, не встречавшиеся у животных экспериментальных групп. У новорождённых крыс, развивавшихся в физиологических условиях, выявлено 3 варианта организации паренхимы КБЛУ: 1) с диффузной лимфоидной тканью; 2) с увеличением плотности расположения лимфоидных клеток непосредственно под капсулой (узлы с КМД); 3) со сформированными ПЛУ. Общее количество КБЛУ при этом составило 8,64±0,14, а их суммарная площадь — 1,20±0,10 мм2. У животных 1-й экспериментальной группы не выявлялись КБЛУ с гомогенной паренхимой, а у животных 2-й группы — с ПЛУ. При этом число лимфатических узлов и их суммарная площадь на срезах у крыс 1-й группы уменьшались в 1,1 раза, ау 2-й группы — уменьшалось их количество, а площадь, напротив, увеличивалась в 1,3 раза. В обеих экспериментальных группах как по количеству, так и по площади доминировали лимфатические узлы, имеющие КМД (см. табл. 1). Основными тенденциями изменения клеточного состава КБЛУ у новорожденных крыс являлись: уменьшение доли клеток лимфоидного ряда, особенно выраженное в узлах с КМД, пропорциональное длительности воздействия этанола на самок; подавление митотической активности, возрастание содержания ретикулярных клеток и усиление макрофагальной реакции. В то же время, эти изменения в узлах с ПЛУ были выражены слабее (табл. 3). Синусная система в лимфатических узлах новорожденных животных контрольной и 1-й экспериментальной группы была представлена субкапсулярным, межузелковыми и мозговыми лимфатическими синусами только в КБЛУ с ПЛУ. В остальных узлах определялся лишь субкапсулярный синус. В большинстве узлов у крыс 2-й группы был выявлен субкапсулярный синус, а в КВ и МВ формирование синусов только начиналось. Помимо изменений морфометрических параметров и клеточного состава тимуса и КБЛУ, у животных экспериментальных групп отмечались полнокровие и расширение сосудов, а также явления эритродиапедеза (рисунок, а). В тимусе у новорожденных крыс 2-й экспериментальной группы регистрировались нарушения организации РЭ. Это проявлялось формированием эпители Обсуждение полученных данных. Полученные нами данные показывают, что состояние первичных и вторичных лимфоидных органов у новорожденных крыс зависит от длительности этаноловой интоксикации их матерей. У экспериментальных животных отмечается тенденция уменьшения абсолютной и относительной массы тимуса, что сопровождается изменениями его клеточного состава, наиболее выраженными во 2-й экспериментальной группе. Уменьшение содержания больших и средних лимфоцитов свидетельствует об угнетении его лимфопоэтической функции, а малых — возможно, обусловлено усилением разрушения клеток. Кроме этого, появляется дисбаланс между процессами миграции и дифференцировки тимоцитов, с одной стороны, и пролиферации и разрушения клеток — с другой [11]. Отсутствие тимусных телец свидетельствует о задержке развития тимуса и снижении функциональной активности РЭ, регулирующих процессы пролиферации и миграции лимфоидных клеток посредством гормонов [3]. Сходные изменения наблюдаются и в клеточном составе КБЛУ. Помимо этого, в КБЛУ выявлено нарушение процессов дифференцировки их паренхимы. Известно, что закладка брыжеечных лимфатических узлов происходит в непосредственной связи с первичными лимфатическими структурами и развитием брюшины, а также характеризуется гетерохронностью их появления, таким образом можно одновременно наблюдать узлы, находящиеся на разных стадиях развития [15]. У новорожденных крыс экспериментальных групп определяется значительное преобладание по числу и площади сечения узлов с КМД. В то же время, в 1-й группе, учитывая отсутствие КБЛУ с гомогенной паренхимой, можно предположить, что этанол препятствует закладке наиболее поздней генерации КБЛУ. Отсутствие лимфатических узлов с ПЛУ у крыс 2-й экспериментальной группы связано с торможением процессов дифференцировки паренхимы КБЛУ, вызванных этанолом. Подтверждением этого является и неразвитая синусная система КБЛУ. Реакция сосудистого русла в виде полнокровия и расширения сосудов, а также диапедезных кровоизлияний различной степени выраженности является типичным проявлением этаноловой интоксикации как у людей, злоупотребляющих этанолсодержащими напитками [2, 4, 12, ], так и у экспериментальных животных [14]. Появление в тимусе животных 2-й экспериментальной группы атипично организованных РЭ (псевдогландулярных структур) может быть следствием диспластических процессов в тимусе, так как у животных контрольной группы мы подобных образований не наблюдали. Сходные структуры часто встречаются в патологоанатомической практике при дисплазии тимуса с псевдогландулярным строением [3]. Для объяснения менее выраженных изменений морфометрических параметров и клеточного состава тимуса у животных 1-й экспериментальной группы необходимо учитывать и 10-суточный период адаптации крыс-матерей к этанолу, в течение которого его поступление в организм естественным образом снижено за счет уменьшения объема потребляемой жидкости [1]. Это обусловливает относительно невысокую концентрацию этанола в тканях зародыша на ранних этапах его развития. Учитывая более раннее заселение эпителиальных зачатков тимуса лимфоидными клетками (11–14-е сутки) [6], по сравнению с брыжеечными лимфатическими узлами (15-е сутки) [10], можно предположить, что эмбриотоксичное действие этанола в большей степени сказывается на закладке лимфатических узлов. Такой параметр, как масса тела новорожденных крыс, не является значимым для оценки строения тимуса. Таким образом, наиболее чувствительными к пренатальному воздействию этанола являются формирующиеся КБЛУ у новорожденных животных, полученных от самок, подвергшихся алкогольной интоксикации только во время беременности. Прегравидарная алкогольная интоксикация в течение 1 мес в большей степени влияет на морфогенез тимуса, что выражается в резком изменении его морфометрических параметров, клеточного состава и появлении микроциркуляторных и диспластических изменений.

Об авторах

Петр Владимирович Пугач

Северо-Западный государственный медицинский университет им. И. И. Мечникова

Email: Petr.Pugach@spbmapo.ru
кафедра анатомии человека 191015, Санкт-Петербург, ул. Кирочная, 41

Сергей Владимирович Круглов

Северо-Западный государственный медицинский университет им. И. И. Мечникова

кафедра анатомии человека 191015, Санкт-Петербург, ул. Кирочная, 41

Наталья Рафаиловна Карелина

Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет

кафедра анатомии человека 194100, Санкт-Петербург, ул. Литовская, 2

Список литературы

Дополнительные файлы