ИНФЛАМЕЙДЖИНГ С ПОЗИЦИИ ГИНЕКОЛОГИЧЕСКОЙ ЭНДОКРИНОЛОГИИ. ТОЧКА ОТСЧЕТА

Полный текст

Обоснование

Вступление женщины в период постменопаузы является нормальной частью жизненного цикла и состоит из ряда изменений в организме, в том числе со стороны иммунной системы [1].

Иммунное старение отражает изменение количества и функции иммунных клеток и их популяционного состава, имеющее многофакторную этиологию, включающую генетические особенности и экологическое влияние [2]. Считается, что снижение функции яичников у женщин играет дополнительную роль в этиологии инфламейджинга – хронического вялотекущего воспаления, характеризующего процесс старение. Известно, что постменопаузальном периоде у женщин наблюдается повышение уровня таких провоспалительных цитокинов, как фактор некроза опухоли-α (TNF-α), интерлейкины-1β, 6, 8 и 13 (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-13), а также снижение процента наивных Т-клеток и накопление Т-клеток памяти, значительное снижение соотношения CD4/CD8 Т-клеток [3]. Результатом этих изменений является ряд функциональных и структурных особенностей, проявляющихся в виде снижения способности бороться с инфекцией, ослабления реакции на вакцинацию, предрасположенностью к аутоиммунным заболеваниям и слабовыраженному воспалению [4].

Понимание молекулярных путей, которые связывают иммунное старение и снижение уровня половых гормонов в постменопаузальный период важно для более полного понимания патофизиологии инфламейджинга, что позволит точно определить мишени для потенциально возможного лечения аутоиммунных, онкологических, сердечно-сосудистых заболеваний, а также для профилактики инфекционных заболеваний у женщин в период постменопаузы [12].

Цель

Изучить иммунные параметры крови у женщин в пери- и ранней постменопаузе.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В обсервационное, одноцентровое, одномоментное, выборочное исследование было включено 50 женщин, наблюдавшихся в отделении гинекологической эндокринологии ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России. Критериями включения являлись: возраст от 45 до 59 лет, стадия репродуктивного старения пери- и ранняя постменопауза (-1, +1a, +1b, +1c по STRAW +10). Критериями невключения являлись: ожирение, системные, онкологические, аутоиммунные заболевания, острые респираторные и обострение хронических заболеваний в течение последних 3-х месяцев; прием антибактериальных, иммуномодулирующих препаратов, а также менопаузальной гормональной терапии за 3 месяца до исследования. Критерий исключения: отказ пациентки от участия в исследовании.

Все участникам исследования определяли тяжесть климактерического синдрома с помощью шкалы Грина [5].

Основные субпопуляции клеток крови: цитотоксические Т-лимфоциты (Т-киллеры), Т-хелперы, NK-клетки, В-лимфоциты, все популяции моноцитов, а также про- и противовоспалительные маркеры на выделенных популяциях моноцитов анализировали с помощью проточной цитометрии. Для обнаружения 27 цитокинов плазмы использовали прибор Bio-Plex Human Cytokine Screening Panel (Bio-Rad Laboratories, США).

Исследование зарегистрировано на сайте клинических исследований Clinical Trials.gov, ID NCT05678192, ID протокола 11-11/11.2021. Исследование было одобрено Этическим комитетом (выписка из протокола №11 от 11.11.2021) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В. И. Кулакова» Минздрава России.

Статистический анализ был проведен с помощью программных пакетов Microsoft Excel, «Statistica 13.5.0». Оценивали характер распределения количественных показателей с помощью критерия Шапиро-Уилка. При нормальном распределении данные представляли как М(SD), где М – среднее значение, SD – стандартное отклонение среднего значения, при отличном от нормального распределении как Ме (Q1; Q3), где Мe – медиана, Q1 и Q3 – нижний и верхний квартили. Для сравнения групп в случае нормального распределения применяли параметрические методы – t-критерий Стъюдента для двух зависимых и независимых переменных. В случае отличного от нормального распределения применяли непараметрические методы – U-критерий Манна-Уитни для двух независимых переменных; критерий Краскела-Уоллиса – для оценки достоверности различий между несколькими независимыми переменными. Корреляционный анализ проводился с помощью непараметрического коэффициента корреляции Спирмена. Для качественных показателей были рассчитаны частоты (%), сравнение показателей между независимыми выборками – с использованием критериев χ² Пирсона и Фишера для небольших выборок. При проверке статистических гипотез критический уровень значимости р принимался равным 0,05, в случае множественных сравнений использовали поправку Бонферрони. 

Результаты

В исследование было включено 50 женщин в возрасте от 44 до 59 лет (средний возраст 50,8 (3,78) лет) в перименопаузе (с продолжительностью аменореи менее 12 месяцев) и постменопаузе (с продолжительностью аменореи ≥ 12 месяцев). Пациентки были разделены на две группы на основании стадии репродуктивного старения: первая – перименопауза (n = 22), вторая – постменопауза (n = 28), далее проводили сравнительную оценку показателей иммунной системы. По возрасту, тяжести менопаузальных симптомов (психоэмоциональных, физических, вазомоторных, сексуальных), женщины обеих групп значимо не различались (p >0,05). При внутригрупповом анализе было обнаружено, что у пациенток в перименопаузе наиболее тяжелое проявление имели вазомоторные симптомы, а в постменопаузе вазомоторные и сексуальные симптомы (p <0,0125).

Проводился сравнительный анализ параметров иммунной системы женщин в пери- и постменопаузе. Показатели клеточного иммунитета оценивали методом проточной цитофлуориметрии: определяли количество классических (CD14++CD16-), неклассических (CD14-CD16++) и промежуточных (CD14+CD16++) моноцитов, содержание субпопуляций лимфоцитов периферической крови: T-лимфоцитов, В-лимфоцитов и NK-клеток. Постадийное гейтирование представлено на рисунке 1.

Следующим этапом определяли уровни экспрессии маркеров HLA-DR и CD11b, а также уровни экспрессии провоспалительных (CD86, CD80, CD40, CX3CR1) и противовоспалительных маркеров (CD163, CD206) среди всех субпопуляции моноцитов. Методом мультиплексного анализа определяли уровень 27 показателей цитокинов и хемокинов плазмы крови. Значимые изменения параметров иммунной системы у женщин в пери- и постменопаузе представлены на рисунке 2.

Уровень классических моноцитов (CD14++CD16-) был значимо выше у пациенток в перименопаузе (p=0,005), а уровень неклассических моноцитов (CD14-CD16++) был выше у женщин в постменопаузе (p=0,034) (Рис.2). Определение уровня интенсивности флуоресценции (MFI – mean fluorescence intensity) после окрашивания выявило значимое повышение экспрессии провоспалительного маркера СD80+ (p=0,031), а также экспрессии противовоспалительного маркера CD163+ (p=0,048) на CD14-CD16++ неклассических моноцитах у женщин в перименопаузе по сравнению с женщинами в период постменопаузы. Также отмечалось повышение уровня CD3-CD19+HLA-DR+ В-лимфоцитов (p=0,034) у женщин в постменопаузе. Значимое повышение уровней прорегенераторного фактора FGF basic (р=0,021) и регулятора периваскулярного воспаления RANTES (р=0,041) было определено у женщин в перименопаузе. Как показано на рисунке 2, уровень провоспалительного маркера хемоаттрактантного белка моноцитов MCP-1 достоверно повышался в постменопаузальном периоде (p=0,022), по сравнению с женщинами в период перименопаузы.

Для оценки связи полученных различий иммунных показателей у женщин в пери- и постменопаузе с клинико-анамнестическими данными – длительностью периода отсутствия менструаций и ИМТ, которые значимо различались в этих группах, провели корреляционный анализ данных параметров.

Учитывая, что показатели, значимо различающиеся между женщинами в пери- и постменопаузе имели корреляционные связи с длительностью периода отсутствия менструаций, и не имели корреляционных связей с ИМТ, можно сделать вывод, что различие параметров иммунной системы в пери- и постменопаузе связано преимущественно с репродуктивным старением.

В нашем исследовании выявлено перераспределение иммунных параметров у женщин в зависимости от стадии репродуктивного старения, что сопровождалось изменением профиля экспрессии цитокинов, в частности повышением провоспалительных маркеров у пациенток в постменопаузе. У женщин в период постменопаузы увеличивалось количество В-лимфоцитов, что, предполагается, делает более напряженным гуморальный иммунный ответ после выключения функции яичников.

Обсуждение

В исследовании мы отметили достоверное повышение уровня MCP-1 у женщин в постменопаузальном периоде (p=0,022), в сравнении с пациентками в перименопаузе. Эти результаты соотносятся с известными на сегодняшний день исследованиями, касающимися теории иммунного старения и формирования хронического вялотекущего воспаления у пожилых людей [6].

MCP-1 играет важную роль в процессе воспаления, привлекая или усиливая экспрессию других воспалительных факторов/клеток. Этот белок прямо или косвенно участвует в патогенезе онкологических, нейровоспалительных, сердечно-сосудистых, аутоиммунных (ревматоидный артрит) заболеваний, а также инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2. Повышение уровня MCP-1 было отмечено у пациентов с COVID-19 и MCP-1 оказался биомаркером тяжелого течения заболевания, наряду с IP-10 [7]. MCP-1 является ключевым модулятором атерогенеза [8, 9]. Kim c коллегами предполагают, что MCP-1 также влияет на остеокластогенез [10, 11].

Tani и другие в своем исследовании показали, что уровень МСР-1 повышался с увеличением стадии репродуктивного старения у женщин и имел достоверную положительную корреляцию с уровнем фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) во время менопаузального перехода (r=0.215, p<0.01) [12].

Интересной находкой явились данные изменения субпопуляций моноцитов с возрастом. Уровень классических моноцитов (CD14++CD16-) — основных источников макрофагов в ткани, был значимо выше у женщин в перименопаузальном периоде (p=0,005), а уровень неклассических моноцитов (CD14-CD16++), отвечающие за фагоцитоз дебриса в сосудах, воспаление, был выше у женщин в постменопаузе (p=0,034). Эти данные косвенно подтверждают гипотезу эволюционного возникновения неклассической моноцитарной субпопуляции: существует гипотеза их происхождения от классических моноцитов. В ряде работ переход классических моноцитов в неклассические был подтвержден с помощью удаления циркулирующих моноцитов клодронатов и дальнейшей инъекции импульсно-меченных клеток в различных животных моделях, включая мышей [13, 14], крыс [15] и макак [16], а также наблюдался у человека [17] и, следовательно, представляет собой эволюционно консервативную программу. Однако это не исключает того, что некоторые клетки неклассического пула моноцитов могут развиваться, не проходя стадию классических моноцитов [18].

В нашем исследовании наблюдалось перераспределение субпопуляций моноцитов (переход классических моноцитов в неклассические) у женщин с увеличением стадии репродуктивного старения. У женщин в перименопаузе был ниже процент неклассической субпопуляции, что, по-видимому, стимулировало функциональную активность оставшихся моноцитов, выражавшуюся в повышение экспрессии как про- (CD80+), так и противовоспалительных (CD163+) маркеров у неклассических моноцитов в перименопаузе.

Ряд исследований, посвященных функциям моноцитов в контексте старения, выявили дополнительные доказательства возрастной дизрегуляции воспалительных реакций. Некоторые из них показывают, что процент воспалительных моноцитов, увеличивается у пациентов с возрастом [19-21].

Также мы отметили повышение уровня CD3-CD19+HLA-DR+ В-лимфоцитов у женщин в постменопаузе (p=0,034). С возрастом происходят значительные изменения всех В-клеточных компартментов, в результате чего может нарушаться гуморальный иммунный ответ. Согласно литературным данным, количество периферических В-клеток с возрастом не меняется, но наблюдаются изменения субпопуляционного состава. Как и в случае с популяцией Т-клеток, периферический B клеточный пул заполняется клетками памяти, подвергшимися воздействию антигена, за счет одновременного снижения количества наивных B-клеток [22].

Согласно мировой статистике, стали отчетливо видны демографические тенденции к увеличению продолжительности жизни и общему старению населения. Старение иммунной системы у лиц обоего пола – закономерный процесс онтогенеза, и у женщин он, по-видимому, отождествлен с вступлением в период постменопаузы и выключением функции яичников. Наши результаты сравнения параметров иммунной системы женщин одной возрастной группы, но разной стадией репродуктивного старения (пери- и постменопауза) еще раз подтверждают вышесказанное утверждение. В связи с этим актуальным является вопрос профилактики возраст ассоциированных заболеваний (остеопороз, сердечно-сосудистые заболевания, сахарный диабет и др.) у женщин, перешагнувших рубеж менопаузы, и влияние МГТ на иммунную систему женщин в этом аспекте представляет научный интерес и клиническую значимость.

Заключение

Старение репродуктивной системы (переход от пери- к постменопаузе) у женщин сопровождается усилением моноцит-ассоциированной воспалительной реакции и гуморального ответа, что отмечается в перераспределении моноцитов в сторону неклассической популяции и повышении уровня CD3-CD19+HLA-DR+ В-лимфоцитов, и MCP-1 – маркера, ассоциированного с воспалением. Ввиду провоспалительной направленности изменений, ассоциированных со старением иммунной системы у женщин при переходе стадии репродуктивного старения от пери- к постменопаузе, предпочтительным представляется «ранний» старт МГТ в период перименопаузы.

Известно, что старение иммунной системы у лиц обоего пола является естественным процессом онтогенеза, а у женщин оно, по-видимому, отождествляется с вступлением в постменопаузу и снижением функции яичников. Учитывая эти результаты, было бы интересно продолжить исследование влияния МГТ на параметры иммунной системы, чтобы внести ясность в актуальный вопрос о том, можем ли мы замедлить или обратить вспять иммунное старение.

 

 

Об авторах

Марина Владимировна Аверьянова

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России

Автор, ответственный за переписку.
Email: miha199031@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-2995-5228

аспирант отделения гинекологической эндокринологии, врач акушер-гинеколог

Россия, Москва

Полина А. Вишнякова

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России; ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (РУДН)

Email: p_vishnyakova@oparina4.ru
ORCID iD: 0000-0001-8650-8240

к.б.н., с.н.с. лаборатории регенеративной медицины

Россия, Москва; Москва

Полина А. Вишнякова

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России; ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (РУДН)

Email: p_vishnyakova@oparina4.ru
ORCID iD: 0000-0001-8650-8240

к.б.н., с.н.с. лаборатории регенеративной медицины

Россия, Москва; Москва

Виктория В. Киселева

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России; ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (РУДН)

Email: victoria.kurnosova.1991@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-3001-4820

м.н.с. лаборатории регенеративной медицины

Россия, Москва; Москва

Виктория В. Киселева

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России; ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (РУДН)

Email: victoria.kurnosova.1991@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-3001-4820

м.н.с. лаборатории регенеративной медицины

Россия, Москва; Москва

Валентина Владимировна Вторушина

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия

Email: v_vtorushina@oparina4.ru
ORCID iD: 0000-0002-8406-3206
SPIN-код: 4593-5961

Кандидат медицинских наук

Россия, ул. Академика Опарина, 4, Москва, 117198

Валентина Владимировна Вторушина

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия

Email: v_vtorushina@oparina4.ru
ORCID iD: 0000-0002-8406-3206
SPIN-код: 4593-5961

Кандидат медицинских наук

Россия, ул. Академика Опарина, 4, Москва, 117198

Любовь Валентиновна Кречетова

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России

Email: l_krechetova@oparina4.ru
ORCID iD: 0000-0001-5023-3476

д.м.н., заведующая лабораторией клинической иммунологии

Россия, Москва

Любовь Валентиновна Кречетова

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России

Email: l_krechetova@oparina4.ru
ORCID iD: 0000-0001-5023-3476

д.м.н., заведующая лабораторией клинической иммунологии

Россия, Москва

Андрей Владимирович Ельчанинов

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России; ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского»

Email: elchandrey@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2392-4439
SPIN-код: 5160-9029

д.м.н., заведующий лабораторией регенеративной медицины, Научно-исследовательский институт морфологии человека имени академика А.П. Авцына

Россия, Москва; Москва

Андрей Владимирович Ельчанинов

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России; ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского»

Email: elchandrey@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2392-4439
SPIN-код: 5160-9029

д.м.н., заведующий лабораторией регенеративной медицины, Научно-исследовательский институт морфологии человека имени академика А.П. Авцына

Россия, Москва; Москва

Тимур Хайсамудинович Фатхудинов

ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (РУДН); ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского»

Email: tfat@yandex.ru

д.м.н., заместитель директора, Научно-исследовательский институт морфологии человека им. академика А.П. Авцына; заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии, директор Научно-исследовательского института молекулярной и клеточной медицины

Россия, Москва; Москва

Тимур Хайсамудинович Фатхудинов

ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (РУДН); ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского»

Email: tfat@yandex.ru

д.м.н., заместитель директора, Научно-исследовательский институт морфологии человека им. академика А.П. Авцына; заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии, директор Научно-исследовательского института молекулярной и клеточной медицины

Россия, Москва; Москва

Светлана Владимировна Юренева

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России

Email: syureneva@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-2864-066X
SPIN-код: 3623-9149

доктор медицинских наук, профессор

Россия, Москва

Светлана Владимировна Юренева

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России

Email: syureneva@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-2864-066X
SPIN-код: 3623-9149

доктор медицинских наук, профессор

Россия, Москва

Список литературы

Дополнительные файлы