Immunohistochemistry methods improvement for confocal microscopy

Abstract

Full Text

Применение современных методов конфокальной микроскопии и микроскопии сверхвысокого разрешения предполагает использование чувствительных иммуноцитохимических методик и набора флуоресцентных маркеров. В отличие от классических методов иммуногистохимии применение ферментных маркеров для конфокальной микроскопии нетипично. Поэтому, переход от иммунопероксидазной иммуногистохимии к флуоресцентной иммуноцитохимии сопряжен с рядом трудностей. Их преодолению посвящено настоящее исследование, выполненное на головном мозге крысы и человека (n=60 и 15) и миокарде человека (n=18). Установлено, что при флуоресцентном исследовании тканей человека важным является правильная обработка и учет автофлуоресценции липофусцина, что не представляет актуальности при изучении головного мозга молодых крыс. Наиболее простым способом перехода от иммунопероксидазной реакции к флуоресцентной является использование меченых флюорохромом антител, реагирующих с пероксидазой. Однако эта методика непригодна для микроскопии сверхвысокого разрешения. Высокую чувствительность иммуноцитохимической реакции демонстрирует использование стрептавидин-биотиновой амплификации в ее флуоресцентном варианте. Наилучшие результаты для микроскопии сверхвысокого разрешения получены при использовании гидрофильных и гидрофобных заключающих сред с показателем преломления ≈1,5. Следует учитывать, что с гидрофобными заключающими средами совместимо ограниченное число флюорохромов.