ACTIVITY OF NUCLEOLAR ORGANIZERS IN ENDOMETRIAL CELLS OF WOMEN WITH NORMAL MENSTRUAL CYCLE

Full Text

Методика определения активности ядрышковых организаторов широко используется для изучения процессов биогенеза рибосом в клетках различного типа [10-12, 14]. Активность ядрышковых организаторов оценивается по количеству и характеру распределения ассоциированных с ними аргентаффинных, т. е. способных окрашиваться нитратом серебра, белков С23 (нуклеолин) и В23 (нуклеофозмин), ответственных за активацию и контроль транскрипции с участием рибосомальных генов [2, 6, 8]. Одним из преимуществ данной методики является возможность оценки степени напряженности биогенеза рибосом в количественном эквиваленте. Определение активности ядрышковых организаторов представляет клинический интерес для изучения динамики изменений степени напряженности биогенеза рибосом в клетках эндометрия на протяжении нормального менструального цикла. Цель исследования - изучить структуру и активность ядрышковых организаторов в эпителиальных и стромальных клетках нормального эндометрия женщин репродуктивного возраста на разных стадиях менструального цикла с помощью гистохимической (аргентаффинной) реакции. Материал и методы. Исследовали биоптаты эндометрия, полученные от 30 женщин репродуктивного возраста, находящихся на оперативном лечении в гинекологическом отделении клиники ЮУГМУ по поводу доброкачественных опухолей яичников, миомы матки (интерстициальная и субсерозная локализация) размером не более 5 см в диаметре. Все женщины имели регулярный менструальный цикл, не получали гормональное лечение, не имели признаков наружного генитального эндометриоза по данным лапароскопии. Средний возраст пациенток составил 34,5±6,9 года. Исследование проводили после письменного информированного согласия пациенток. Проведение исследования было одобрено этическим комитетом ЮГМУ (протокол № 3 от 13.03.2017 г.). Парафиновые блоки биоптатов эндометрия фиксировали в 10 % растворе формалина. В зависимости от фазы менструального цикла эндометрий был распределен на подгруппы: фаза пролиферации - ранняя стадия (А), средняя стадия (Б), поздняя стадия (В); фаза секреции - ранняя стадия (Г), средняя стадия (Д), поздняя стадия (Е). Для определения соответствия эндометрия фазе и стадии менструального цикла изготовили серийный набор гистологических срезов толщиной 5-7 мкм, который был окрашен гематоксилином - эозином. Из исследования исключали эндометрий с признаками гиперпластических изменений (гиперплазия, полипы эндометрия), острого и хронического воспаления. Для определения активности ядрышковых организаторов изготовили другой набор серийных гистологических срезов, которые окрашивали 50 % коллоидным раствором нитрата серебра (ОАО «Аурат») по методу Д. Крокера (1983) [1]. Содержание ядрышек, а также интрануклеолярных, расположенных в ядрышке, и экстрануклеолярных, расположенных в кариоплазме ядра, аргентаффинных включений (белков, ассоциированных с ядрышковыми организаторами, выявляемых серебрением) определяли в клетках железистого эпителия, покровного эпителия, а также в фибробластах, лимфоцитах и гистиоцитах стромы в каждой фазе и стадии менструального цикла. Анализировали по 250 эпителиальных клеток, по 400 клеток стромы эндометрия, по 10 лимфоцитов стромы и по 8 гистиоцитов стромы на отдельную стадию при увеличении 1000 с масляной иммерсией и зеленым светофильтром (рис. 1, 2). Результаты подвергали статистической обработке с помощью программы SPSS7 (IBM). Для выявления значимости различий применяли критерий Манна-Уитни. Результаты исследования. Установлено, что в клетках железистого и покровного эпителия, начиная от ранней стадии фазы пролиферации к ее средней стадии, происходит значимое увеличение числа ядрышек, интрануклеолярных включений, экстрануклеолярных включений и суммарного числа включений (табл. 1, 2). От средней стадии фазы пролиферации к поздней стадии той же фазы менструального цикла в железистом эпителии увеличивается число интрануклеолярных и экстрануклеолярных включений, а также их суммарное число. В покровном эпителии на поздней стадии фазы пролиферации по сравнению со средней стадией увеличивается число ядрышек, интра- и экстрануклеолярных включений, а также суммарное число включений. В фибробластах стромы к средней стадии фазы пролиферации по сравнению с ее ранней стадией увеличивается число ядрышек, интра- и экстрануклеолярных включений, суммарное число включений. К поздней стадии фазы пролиферации в фибробластах увеличивается число ядрышек, интрануклеолярных включений и суммарное число включений. Таким образом, на протяжении фазы пролиферации в клетках эндометрия наблюдается повышение числа ядрышковых организаторов, что свидетельствует о нарастании активности процессов биогенеза рибосом в данных клетках. При сравнении показателей активности ядрышковых организаторов в конце поздней стадии фазы пролиферации отмечалось снижение числа ядрышек, интра- и экстрануклеолярных включений, их суммарного числа, наблюдаемые к началу ранней стадии фазы секреции в клетках железистого, покровного эпителия и фибробластах стромы. На средней стадии фазы секреции по сравнению с ее ранней стадией в клетках железистого эпителия уменьшалось число ядрышек, интрануклеолярных включений и суммарное число включений. Одновременно в клетках покровного эпителия уменьшалось только число интрануклеолярных включений, а также суммарное число включений, а в фибробластах стромы - увеличение числа ядрышек, интрануклеолярных включений и суммарное число включений. Таким образом, от ранней стадии фазы секреции к средней степень напряженности биогенеза рибосом в клетках железистого и покровного эпителия снижалась, а в фибробластах стромы повышалась. При сравнении показателей активности ядрышковых организаторов между средней стадией фазы секреции и ее поздней стадией в клетках железистого, покровного эпителия и фибробластах стромы выявлено увеличение числа ядрышек, интра- и экстрануклеолярных включений, суммарного числа включений. Это свидетельствует о повышении степени напряженности биогенеза рибосом в данных клетках во время фазы секреции. В лимфоцитах и гистиоцитах стромы изменений активности ядрышковых организаторов на разных стадиях менструального цикла с помощью методики Д. Крокера не выявлено. Обсуждение полученных данных. Известно, что процессы биогенеза рибосом в клетках эндометрия регулируются половыми стероидами [4]. Биологический смысл фазы пролиферации заключается в восстановлении толщины функционального слоя эндометрия благодаря активным процессам клеточного деления, которые стимулируются нарастающим количеством эстрогенов, секретируемых растущим и созревающим фолликулом. Эстрогены при взаимодействии с рецепторами активируют гормон-рецепторный комплекс, который перемещается в ядро, где связывается с акцепторными сайтами хромосом и инициирует транскрипцию генов, обеспечивающую синтез белков [3-5]. Повышение активности ядрышковых организаторов подтверждает нарастание активности биогенеза рибосом в клетках эндометрия в течение фазы пролиферации. Снижение активности ядрышковых организаторов свидетельствует о переходе эндометрия в фазу секреции, которая регулируется прогестероном, обладающим свойством подавлять биогенез рибосом [4, 5]. В среднюю стадию фазы секреции наблюдается наименьшая активность ядрышковых организаторов в эпителиальных клетках эндометрия, что совпадает с наибольшей концентрацией прогестерона. В условиях ингибирующего действия прогестерона в фибробластах стромы наблюдается повышение количества ядрышек на средней стадии фазы секреции по сравнению с ранней стадией фазы пролиферации. На наш взгляд, это связано с процессами предецидуализации в собственной пластинке слизистой оболочки матки (эндометрии), в результате которых соединительнотканные клетки становятся более крупными, приобретают округлые формы и полигональные очертания. В их цитоплазме появляется гликоген. В межклеточном веществе стромы вокруг сосудов и под эпителием желез увеличивается количество протеогликанов [3]. На поздней стадии фазы секреции вместе со снижением концентрации прогестерона наблюдается повышение активности ядрышковых организаторов, что свидетельствует об активации процессов биогенеза рибосом, которые, по нашему мнению, обеспечивают подготовку клеток эндометрия к процессам запрограммированной клеточной гибели - апоптозу. При этом продуцируются белки-индукторы апоптоза, активируются рецепторы апоптоза, а также комплекс каспаз [7, 9, 13]. Вывод. Активность ядрышковых организаторов является информативным показателем для оценки функционального состояния эпителиальных и стромальных клеток слизистой оболочки матки на различных стадиях менструального цикла. Вклад авторов: Концепция и дизайн исследования: Е. Л. К., Е. В. И., Т. В. У. Сбор и обработка материала: Е. В. И. Анализ и интерпретация данных: Е. Л. К., Е. В. И. Написание текста: Е. Л. К., Е. В. И., Т. В. У. Авторы сообщают об отсутствии в статье конфликта интересов.

About the authors

Ye. L. Kurenkov

South Ural State Medical University

Department of Obstetrics and Gynecology 64 Vorovskogo St., Chelyabinsk 454092

Ye. V. Igenbayeva

South Ural State Medical University

Email: bulba2606@mail.ru
Department of Human Anatomy and Operative Surgery 64 Vorovskogo St., Chelyabinsk 454092

T. V. Uzlova

South Ural State Medical University

Department of Human Anatomy and Operative Surgery 64 Vorovskogo St., Chelyabinsk 454092

References

Supplementary files