Фиксация цинк-формалином как адекватная замена ценкер-формола при гистохимическом выявлении островковых клеток поджелудочной железы
- Авторы: Манских В.Н.1
-
Учреждения:
- Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
- Выпуск: Том 159, № 1 (2021)
- Страницы: 29-32
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья получена: 05.03.2022
- Статья одобрена: 05.03.2022
- Статья опубликована: 15.01.2021
- URL: https://j-morphology.com/1026-3543/article/view/104471
- DOI: https://doi.org/10.17816/1026-3543-2021-159-1-29-32
- ID: 104471
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Установить возможность использования фиксации цинк-формалином вместо ценкер-формола для избирательного выявления всех основных типов клеток островков Лангерганса поджелудочной железы (А, B, D) с помощью окраски классическими гистохимическими методами, направленными на выявление этих клеток.
Материал и методы. Образцы поджелудочной железы голого землекопа (Heterocephalus glaber, Rüppell, 1842) были зафиксированы в течение суток в цинк-формалиновом фиксаторе следующего состава: 37% формальдегид – 300 мл, хлорид цинка – 50 г, ледяная уксусная кислота – 1,9 мл, дистиллированная вода – 2 л. После фиксации следовала стандартная процедура заливки в парафин и окраски азаном Гейденгайна и комбинацией азана и паральдегид-фуксина Гомори по рутинным протоколам.
Результаты. Обнаружено, что отчётливую дифференциальную окраску всех 3 мажорных типов островковых клеток можно получить, если зафиксировать образцы поджелудочной железы в течение суток в цинк-формалиновом фиксаторе. При этом, как и после фиксации ценкер-формолом (но не формалином или жидкостью Буэна), отчётливо выявляются не только А и В, но и D-клетки. Сопоставление с иммуногистохимическими данными картины распределения различных клеток в островке голого землекопа, выявленной гистохимическими окрасками показало их полное совпадение.
Выводы. Цинк-формалин может быть использован как более удобный и безопасный фиксатор для выявления клеток островков Лангерганса (в том числе и D-клеток) с помощью окрасок азаном Гейденгайна и паральдегид-фуксином по Гомори вместо содержащего соль ртути ценкер-формола.
Ключевые слова
Полный текст
Для выявления разных типов клеток поджелудочной железы до сих пор остаются вполне валидными гистохимические методы (окраска азаном Гейденгайна, хромовым гематоксилином-флоксином и паральдегид-фуксином по Гомори) наряду с электронно-микроскопическими и иммуногистохимическими способами [1–3]. При этом первые имеют некоторые явные преимущества: они многократно дешевле, отличаются экономией времени и, в сравнении с иммуногистохимией, могут быть использованы даже для работы с теми видами животных, для клеток которых нет коммерческих антител.
Для гистохимического окрашивания А- и В-клеток обычно рекомендуют фиксацию образцов смесью Буэна [2]. Эта смесь, однако, не оптимальна, если в дальнейшем потребуется иммуногистохимическое исследование. Кроме того, ещё в 1931 г. W. Bloom обнаружил, что в поджелудочной железе человека и некоторых животных (морских свинок) можно выявить ещё один тип клеток (впоследствии названный D-клетками), если материал зафиксировать ценкер-формолом по Максимову и окрасить азаном [4]. Эти клетки совершенно не окрашиваются, если материал зафиксирован другими смесями (Карнуа, Буэна, фосфатно-солевым раствором формалином) [3]. Однако сегодня ценкер-формол можно отнести к довольно редко используемым фиксаторам, поскольку он содержит в своём составе очень токсичную соль ртути (сулему), приобретение, хранение и утилизация которой сопряжены со значительными трудностями. Кроме того, он не очень удобен, так как требует дополнительной процедуры удаления из препаратов ртутных осадков.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Автором настоящей заметки при исследовании микроскопической анатомии нового лабораторного грызуна, голого землекопа (Heterocephalus glaber, Rüppell, 1842), было впервые обнаружено, что отчётливую дифференциальную окраску всех трёх мажорных типов островковых клеток можно получить, если зафиксировать образцы поджелудочной железы в течение сут в цинк-формалиновом фиксаторе следующего состава: 37% формальдегид – 300 мл, хлорид цинка (марки ХЧ) – 50 г, ледяная уксусная кислота – 1,9 мл, дистиллированная вода – 2 л [5].
После заливки в парафин по рутинной процедуре и применении стандартной окраски азаном удалось выявить все 3 типа островковых клеток (рис. a): окрашенные в кирпично-красный цвет А-клетки (центр островка), буровато-розовые В-клетки (периферия островка) и светло-зелёные (или голубые, в зависимости от того, добавлен ли в смесь Маллори световой зелёный или анилиновый синий) D-клетки (на границе зон А- и В-клеток). Окраску удалось легко скомбинировать с паральдегид-фуксином по Гомори, что дало ещё более контрастное окрашивание B-клеток, приобретших тёмно-фиолетовый цвет (рис. b). Сопоставление с иммуногистохимическими данными [6] картины распределения различных клеток в островке, выявленной гистохимическими окрасками, показало их полное совпадение.
Рис. Островок поджелудочной железы голого землекопа (Heterocephalus glaber): a – окраска азаном (со световым зелёным в смеси Маллори), цитоплазма А-клеток – красно-коричневая, В-клеток – розовая, D-клеток – нежно-зелёная; b – окраска азаном в комбинации с паральдегид-фуксином по Гомори, цитоплазма А-клеток – тёмно-красная, В-клеток – тёмно-фиолетовая, D-клеток – серо-голубая. В обоих случаях ядра окрашены азокармином в красный цвет. Ок. ×10, об. ×100
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, фиксация цинк-формалином позволяет выявлять с помощью классических гистохимических методов все 3 основных типа клеток островков Лангерганса (в том числе и D-клетки). Этот фиксатор хорошо (лучше, чем фосфатно-солевой раствор формалина) сохраняет структуру ткани и не только подходит, но даже рекомендован для фиксации с иммуногистохимическими целями (если последнее будет необходимо) [5]. Он не содержит солей ртути и потому работа с ним не сопряжена с соответствующими трудностями и опасностями.
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ / ADDITIONAL INFO
Источник финансирования. Автор заявляет об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования.
Конфликт интересов. Автор декларирует отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Вклад авторов. Автор подтверждает соответствие своего авторства международным критериям ICMJE и одобрил финальную версию перед публикацией.
Funding source. This study was not supported by any external sources of funding.
Competing interests. The author declare that he have no competing interests.
Author contribution. The author confirms the compliance of his authorship, according to international ICMJE criteria and approved the final version to be published.
Об авторах
Василий Николаевич Манских
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Автор, ответственный за переписку.
Email: manskikh@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-6404-8105
Россия, Москва
Список литературы
- Никонова Л.Г. Преобразования а-клеток панкреатических островков после физических нагрузок при нарушении толерантности к глюкозе // Морфология. 2016. Т. 150, № 5. С. 68–70.
- Торопцев И.В., Ещенко В.А. Экспериментальный дитизоновый диабет. Томск: Издательство Томского университета, 1975.
- Baskin D.G. A historical perspective on the identification of cell types in pancreatic islets of Langerhans by staining and histochemical techniques // J. Histochem. Cytochem. 2015. Vol. 63. P. 543–558. doi: 10.1369/0022155415589119
- Bloom W. New type of granular cell in islets of Langerhans of man // Anat. Rec. 1931. Vol. 49. P. 363–371.
- Коржевский Д.Э., Гиляров А.В. Основы гистологической техники. Санкт-Петербург: СпецЛит, 2010.
- Kramer B., Buffenstein R. The pancreas of the naked mole-rat (Heterocephalus glaber): an ultrastructural and immunocytochemical study of the endocrine component of thermoneutral and cold acclimated animals // Gen. Comp. Endocrinol. 2004. Vol. 139. P. 206–214. doi: 10.1016/j.ygcen.2004.09.006
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)